大小鼠Von Frey测痛实验方法全面解析：操作技巧与注意事项

Von Frey，也被称为纤毛机械刺激针，它通过在皮肤上施加细丝刺激来评估触觉敏感性。这种测试方法常被用作衡量外周和/或中枢敏化状态下异常疼痛的替代指标，在疼痛研究领域广泛应用于各种动物模型。

啮齿动物的临床前模型对于探索病理生理机制以及寻找新型镇痛药物而言，具有不可估量的价值。然而，啮齿动物的疼痛评估往往充满挑战。通常，它们对机械或热刺激的反应变化，被用作衡量疼痛敏感性的行为指标。

在Von Frey测试中，我们会对啮齿动物身体的特定部位施加点状刺激，并记录下引发其撤回反射所需的刺激强度。这一过程通常借助具有特定弯曲力的校准光纤来实现。机械敏感性测试则涉及到使用细校准的塑料丝对后爪足底表面施加刺激。机械撤回阈值被定义为能够引发撤回反射的最小规格细丝，目的在于测量机械伤害感受，以评估动物检测有害刺激的能力。一旦这种反应发生，所需的压力会以克为单位进行记录，这个值被视为个体的阈值。目前，已有电子测痛仪问世，它能够连续施加力度，并提供连续尺度的脚爪撤退阈值。

一、实验操作流程

步骤a：将小鼠放入高架线栅的测试室内。
步骤b：让每只小鼠在测试室内静置一个小时，以便它们适应环境。
步骤c：将小鼠放置在宽规格的金属丝网表面上，首先测试其左后爪。通过从网的下侧将Von Frey细丝施加到小鼠后爪的足底表面来进行测试。当刺激达到阈值时，小鼠会通过弹开爪子来作出反应。起始测试时，我们采用0.6g的Von Frey细丝。将细丝轻轻按压在后爪的足底表面，施加足够的力使细丝弯曲，并保持接触1-2秒。根据对前一个细丝的反应，我们将选择下一个细丝的尺寸。如果没有观察到撤回反应，则选用更高一级的细丝；若出现撤回反应，则选用更低一级的细丝。通过不断增加不同硬度的Von Frey细丝规格，并重复此过程，直至刺激引发后爪缩回或舔舐行为。我们将持续施加细丝，直至对同一只爪子进行五次测试，每次测试之间至少间隔2分钟。
步骤d：随后，用相同的方法对右后爪进行测试。

二、测试阶段

测试1：在适应环境后的24小时，使用与适应期相同的程序，再次使用Von Frey细丝对小鼠进行测试。
测试2：在适应环境后的48小时，再次按照适应期的程序，使用Von Frey细丝对小鼠进行测试。

在整个实验过程中，我们将多次重复测试，并详细记录每次测试的结果。此外，我们还将检测动物的缩爪潜伏期，即在药物注射前（给药前）和注射后，分别测量同一只动物的同侧（结扎侧）和对侧（未结扎侧）爪子的撤回阈值。最终的结果将以ΔPWT（克）的形式表示，即对侧潜伏期减去同侧潜伏期。