人类永生化表皮细胞HaCaT培养攻略

HaCaT细胞是人类永生化表皮细胞，由角质形成细胞培育而来的，保留了角质形成细胞分化能力，是非肿瘤来源的人正常皮肤永生化角质形成细胞株，与正常人角质形成细胞分化特性相似，可以繁殖150代以上，但不是肿瘤细胞，不具有肿瘤特性。

该细胞较难消化，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚红消化5min作用，有时可能高达10min，主要由于细胞不同分化程度和融合度而异。注意消化前一定要用PBS清洗细胞2-3次，铺板时一定要均匀，因为HaCat成片生长，铺板不匀会存在局部生长过密难以消化，生长稀疏部分容易消化过度的情况。

图a 低Ca2+条件下HaCat细胞基础状态和图b高Ca2+条件下HaCat细胞分化状态

10%FBS培养体系中的Ca2+足以诱导该细胞分化，也就是说，正常培养体系下，该细胞会逐渐分化，分化前细胞近纺锤形，排列较松散，分化后细胞向立方体发展，排列紧密，呈片状生长。

低钙离子条件下，HaCat增殖更快，K14的表达仅限于表皮基底层，而K10和总合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通过免疫荧光实验证实了HaCat细胞分化表型的获得，与第6天相比，分化标记K10在HaCaT细胞中的表达在第14天显著增加，几乎100%的细胞是阳性的，这可能和细胞密度有关。

牛脑垂体物常用作无血清细胞培养的生长补充剂，可促进上皮细胞、内皮细胞和黑色素细胞增殖，广泛用作各种上皮细胞和黑色素细胞培养中的补充剂。此外，其具有抗氧化能力，可对抗过氧化氢诱导的细胞坏死，蛋白质氧化，膜破碎和DNA损伤。