收到不同细胞的一般处理方法详解
浏览次数:146 发布日期:2023-6-14
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以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2培养。
三、收到冻存细胞的处理方法:
1.37°C水浴预热培养基;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。