人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y培养常见问题及解决办法

人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y） 是于1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤 SK-N-SH细胞系经3次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。该细胞的密度可高达106 cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羟化酶的活性。基本形态上皮样，多数贴壁，少数悬浮； 营养体系：推荐DMEM：F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S。
 

表1 SH-SY5Y细胞基本信息

图1 SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）
 

首先，我们讨论的是SY5Y五天传一代算不算正常？SH-SY5Y 增殖缓慢，再加上喜欢聚团生长，镜下观察融合率不高，但细胞簇实际密度大，需要5-7天才能达到80%以上的融合率，所以5-7天传一代很正常（如图2所示，融合率约为70%的SY5Y）。如果细胞培养达到一周都无法传代，建议把细胞消化下来，接种到更小的孔板中，增加细胞密度，促进细胞生长。
 

接下来我们讨论第二个话题SY5Y悬浮细胞过多正不正常？SY5Y的生长特点为大部分贴壁，呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于成簇生长，容易成团；少部分悬浮，圆润有光泽。 如果SY5Y出现大量悬浮是不正常现象。如图3所示，悬浮细胞居多的SY5Y。
 

图2 悬浮细胞居多的SY5Y

如何解决这种情况呢？如果贴壁细胞生长状态良好、密度适中，可以舍弃悬浮细胞；如果贴壁细胞很少，用胰酶消化并离心，将细胞用新鲜的完培重悬并接种到培养瓶，隔段时间观察细胞是否贴壁。
 

最后我们讨论一下不同营养体系培养的SY5Y形态差异大不大。我们对比了两种营养体系培养的SY5Y细胞形态。体系一是DMEM+20%FBS-热灭活，体系2是DMEM-F12 + 10%FBS（如图4所示）。在培养的第2天和第5天进行了相应的形态比较。传代第2天，低密度下，两种营养体系培养的SY5Y形态没有明显区别，均为少数悬浮，多数呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于聚团生长；传代第5天，体系2培养的SY5Y团块话过于严重，细胞黏在一起，细胞轮廓难以分辨清楚，体系1细胞有略微聚团（SY5Y本身有聚团生长特性），细胞形态正常。体系1更适合细胞增殖。
 

图3 两种营养体系培养的SY5Y形态对比图（两种营养体系所用血清批号一致）