标准工作流程中储存时长对外周血干细胞移植术后效果的影响

外周血干细胞（PBSCs）广泛用于自体造血干细胞移植（ABSCT）。这些细胞会储存数月甚至数年，通常是在低温下≤−140°C，直到使用。虽然，有研究报告对长期储存后的PBSCs的CD34+活性和克隆形成试验进行了几项体外研究，但只有少数考虑了长期储存对体内造血系统恢复的影响。

在2017年，来自德国海德堡大学的课题组通过对105例多发性骨髓瘤患者的移植手术，分析了外周血干细胞经过长期存储对移植效果的影响。研究对象：外周血干细胞，都经过了完整的冻融工作流程处理：采集、离心、程序降温仪（CRF）、添加10%DMSO保护液等、气相液氮存储、低温运输和专用设备融解。处理后的PBSCs最终产品被存储在血袋中（NC concentration of ≤5 × 10⁸/mL and atotal volume of 100 mL per bag）。

备注：PBSCswere processed and stored in accordance with the German Medical Council andresponsible scientific society’s guidelines [26-28].

实验对象选择了在2003年至2015年之间接受过HDmelphalan化疗及ABSCT的患者。第一个疗程中包括了HD化疗和ABSCT处理。如果对于那些没有完全恢复或接近完全恢复的病例，在第二次或第三次移植时，患者只接受CD34细胞。

根据PBSC存储周期（列2-4）， ABSCs的变化，研究人员分析了247个ABSCT全疗程病例，table 2概述了在实施ABSCT方案时，不同患者在每次治疗或者急救中所使用的细胞储存时长的分布情况。

储存时间小于12个月的细胞被优先用于第一个或者第二个疗程，只有第二，第三次的急救治疗才用储存时间>12 并≤60 个月 (n = 75) 和 >60个月的细胞 (n = 29)。正如预期的一样，由于PBSC储存时间的增加，进行ABSCT时的年龄也逐渐增加。且各组间移植的CD34+细胞数量（P=0.86），无显著性差异。
造血细胞重建率受PBSC的储存时间影响

表4：经过化疗和移植之后，造血细胞的恢复情况

实验人员将所有ABSCT分为了A，B，C三组。A组为小于12个月储存时长的细胞。B组为大于12个月且小于60个月的细胞。C组为大于60个月的细胞。储存时长对白细胞和中性粒细胞恢复没有影响。正相反，接受保存≤12个月的PBSCs的患者与收到存储>12个月且≤60个月的患者相比显示出较慢的白细胞和中性粒细胞的恢复。存储组间，移植的CD34+数量和到达白细胞移植的时间不相关。中性粒细胞移植的时间与移植的CD34+细胞数量不相关。

Kaplan-Meier分析和对数秩检验确定时间曲线，比较并分析白细胞，中性粒细胞和血小板恢复情况时，得到了相似的结论： 

>12个月且≤60个月的细胞依然恢复的更快。各组间的血小板恢复没有显著差异。在C，D组之间的血小板恢复没有显著差异。

≤12个月及>12个月及≤60个月的PBSC两存储组，中性粒细胞恢复的时间差距在亚组的第二次ABSCT中得到证明。这排除了之前的ABSCT的混淆效应。在所有亚组中，没有发现再生障碍，血小板和白细胞与PBSC储存时间有任何关系。为了证实该结论，还针对D组增加了一个数据分析：3次ABSCT移植后患者的术后效果比较；并再次发现血液重组和储存时间无显著差异。

  本次研究在很多方面都与之前的文献有一致结论。

• 接受中期或长期存储时长PBSC移植的患者，中性粒细胞恢复时间更短。

• 血小板恢复速度，在3个储存组之间没有显著差异。

• 各存储组之间对白细胞和血小板植入的时间没有差异。
  本次与预期不一致的结论

本次研究中，患者接受了≤12个月储存的PBSCs与那些储存了一段时间的PBSC相比，白细胞和中性粒细胞恢复延迟1天。这表明在第2，3次ABSCT时，白细胞计数会更快到达<1.0× 10⁹/L。这是在其它研究中没有出现的现象，当然这些数据是否可靠可能还需要在以后的研究中确认。

之前，长期储存细胞的方法是储存在≤-180℃的液态或气态氮中，这是为数不多的、去探究≤-140℃温度下细胞产品对治疗效果影响的课题。同样，有很多科研机构都研究过CD34+长期储存后的活力，并且表明了PBSC经过长达14年的低温储存仍能保持活力并进行安全的移植治疗。

然而，据我们所知，很少有团队调查长期储存的细胞在HD化疗和ABSCT后对造血功能恢复的影响。本次共分析了147个使用中期或长期PBSC的ABSCT手术案例。这与之前的研究相比，案列数量明显更多。此外，分析是按照移植的先后顺序进行的：第一次ABSCT，第二次ABSCT，第三次ABSCT，这是典型的MM患者的治疗计划。这种方式允许团队进行亚组分析（第二次/第三次ABSCT），以确定在移植长期储存PBSC的情况下，移植的先后顺序对造血功能恢复效果的可能影响。

本次研究的结论中，侧面强调了严格执行手册标准中每一个工作流程、使用质量稳定的设备以及耗材是必要的；德国BV50/BV45程序降温仪（包括Smartline）、法国液空气相液氮罐（Arpege170 和RCB1000）是该实验室长期使用的冻存设备，这为临床样本库选择合适的设备提供了实验数据支持。

    上述内容来源于Storage Duration of Autologous StemCell Preparations Has No Impact on Hematopoietic Recovery after Transplantation（Katharina Lisenko等）  Biologyof Blood and Marrow Transplantationt 23 (2017) 684–690

BV45程序降温仪用于细胞在进入液氮温度前的降温处理以及复苏；使用标准化的三温度传感器并经过严格的校准，保证温度的真实性。实现温度曲线，腔内温度，样品温度，以不同的颜色显示在监控器。

同时，该型号具备监控自增压供给罐的液氮供给压力的功能，这项新的技术保障了设备在降温过程中稳定性。

开门方式为顶盖开门，具有自动和手动植冰功能。当达到冰点时，自动植冰开始（第二控制阀），从而避免对样品有害的再结晶阶段。集成的TCA可实现冻结过程的可持续优化通过终点（样品）温度传感器进行监测。

软件具备预装成熟的程序：红十字会（欧洲）已成熟应用的用于淋巴细胞（血袋或冻存管），解融程序也可以使用。

北京博益 液氮事业部 长期为您提供上述产品的技术咨询服务：

孙元元（技术部）
Tel：13810818543
柴丹（销售部）
Tel：13810910943
田建华（应用工程师）
Tel：18302907782
张婷瑞（应用工程师）
Tel：13910490151
联系邮箱：sales@bio-one.cn