焦虑性抑郁心理应激的几种造模方法

心理应激是指机体在某种环境刺激（应激源）作用下引起的心理生理机能改变的过程，动物慢性应激能较真实的模拟出人类生活的应激情境，常用于研究人类心理生理应激反应以及模拟人类情绪类疾病的临床发病特点。慢性束缚应激（Chronic restraint stress, CRS）、慢性情绪应激（Chronic emotional stress, CES）以及慢性不可预见性温和应激（Chronic unpredictable mild stress, CUMS）是常见的慢性心理应激造模方法，常用于建立动物的焦虑样、抑郁样等情绪类疾病模型。大量文献报道，CRS 和 CES能同时诱导大鼠的焦虑和抑郁样行为，而CUMS 则主要用于建立大小鼠的抑郁模型。

本实验采用 CRS（3h、6h）、CES为焦虑性抑郁大鼠的心理应激造模方法，以焦虑模型大鼠和抑郁模型大鼠为对照，并分别从14 d、21 d、28 d 三个时间点进行比较分析，通过检测各心理应激模型大鼠的行为学和脑内神经递质，优选出一种最佳的焦虑性抑郁心理应激造模方法。

动物造模

• 焦虑模型

采用不确定性空瓶饮水应激焦虑模型，进行定时喂水训练7 d。定时喂水训练为每日 2 次，时间分别为 8:00--8:10 和18:00--18:10，此两个时间段内给动物饮水，其他时间不再给水。7 d 后开始进行应激实验，在上述两个时间段内随机选取一个作为空瓶应激时间点，给动物以空水瓶诱发其情绪应激，另一个时间段给动物饮水，此应激持续 14d。

• 抑郁模型

采用慢性不可预见性应激抑郁模型，给予动物持续 21d的慢性温和不可预测性应激，刺激因素包括：4 ℃冰水浴或40 ℃温水浴（4min），禁食或禁水24h，倾笼24 h，24 h光照或黑暗， 电击足底（50 V，3 min），夹尾（1 min），每天给予1-2种应激，同种应激不连续出现，其中同种躯体应激一周一次，造模期间动物均孤笼饲养。

• 焦虑性抑郁模型

采用3种不同的焦虑性抑郁模型，均为心理应激方法。国内外文献表明此 3种方法均能使动物产生焦虑和抑郁样行为。
① 慢性束缚应激3h：将动物束缚于特制的束缚器上，每日上午束缚1次，每次3h。
② 慢性束缚应激6h：将动物束缚于特制的束缚器上，每天9:00--15:00进行束缚，共6h。
③ 慢性情绪应激：动物每笼4只，应激方法包括光照或黑暗24h，拥挤24h，孤养24h，每天下午3:00-6:00 禁食或禁水1h，电击（20次，持续5s，10mA，间隔30s），倾笼24h，每天采用 1种应激，同种应激不连续出现。

动物行为学检测

• 高架十字迷宫实验

将大鼠放入迷宫的中央平台处，使其头部正对封闭臂，释放后记录以下指标：① 进入开放臂次数（OE）；② 进入封闭臂次数（CE）；③ 进入开放臂时间（OT）；④ 进入封闭臂时间（CT）。由上述指标计算出：① 进入开放臂的比例（OE%）：OE/( OE +CE)×100%；② 开放臂停留时间比例（OT%）：OT/( OT + CT)×100%。每只大鼠测试5min。

• 旷场测试

将大鼠放入到一个长宽高分别为80 cm、80 cm、40 cm 的黑色敞箱中，敞箱底面平均划分为 25 个小方格。实验前 30 min 将待测大鼠放入测试房间，大鼠从敞箱中央放入，观察记录大鼠4 min内水平运动格数以及垂直竖立次数，计算水平和垂直得分的总和。

• 场景恐惧测试

于测试前1 d 对大鼠进行训练，大鼠在斯金纳箱适应 2 min 后，给予 30 s 的噪音（5k Hz, 75 d B），在噪音结束最后 2 s 同时给予电击（50 V），大鼠继续呆在箱内 30 s，然后取出放回笼内，24 h 后进行测试，将大鼠放入斯金纳箱，2 min 后给予 60 s 的噪音，记录 60 s 内大鼠的不动（freezing）时间百分比。  

• 强迫游泳实验

将大鼠放入高、直径分别为50 cm、20 cm 的圆柱形水缸中，水深约 40 cm，水温保持在（25 ± 2）℃。实验开始后 1 min 为适应时间，适应结束后记录 5 min内大鼠的不动时间（大鼠两前爪停止游动，身体呈漂浮状态记为不动）。

如果您也对动物实验感兴趣，我们的公众号：bioviewer，动物神经科学与行为学专注于动物神经科学与行为学的实验知识的方法传播与分享交流，您可以推荐给您身边的朋友、同学以及老师，我们会定期更新您需要的相关实验方法的视频和文章，希望能对大家带来帮助！