预防细胞培育基污染的四大方法

细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培育基受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难扫除或杀灭，其间以支原体更难扫除，因此从预防着眼为上。那细胞培育基预防污染的四大方法如下：

一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体。
1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用。
2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培育液，参加含BM-1的1640培育液培育3天后，吸除培育液，再参加含BM-2的1640培育液培育4天，如此连续三个轮回。
3．检测：用33258荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）。
4．培育：铲除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培育基液中，再传代培育3～4次。
5．镜检：如铲除不完全可再进行处理至纯洁停止（一般3个轮回即能被完全消除），即先用含BIP培育液培育12天后，再按上述方法处理。

二、加温除菌法
把受污染的细胞置41℃中作用5～10小时。

三、动物体内接种除菌法
把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消除支原体，而肿瘤细胞却能在体内持续成长，待一定时间后，从体内取出细胞培育基再进行培育繁衍。

四、巨噬细胞吞噬法
从动物腹腔采取巨噬细胞，为扫除其它细胞成分，可先进行纯化，然后再参加被支原体污染的细胞培育液中混合培育。在培育过程中，为查看支原体是否已被消除洁净，可利用支持物培育法验证，取出支持物逐日染色、镜检调查，至支原体已被消除洁净停止。