使用切向流过滤对基于人体巨细胞病毒载体的HIV-1疫苗进行浓缩/换液

基于病毒的生物制品生产中的切向流过滤应用

来自美国堪萨斯大学的科学家们在2019年第37期的《Vaccine》杂志上发表了题为“Stabilization and formulation of a recombinant Human Cytomegalovirus vector for use as acandidate HIV-1 vaccine”的文章。文中，研究人员指出减毒活疫苗/载体候选物天然较不稳定，如果没有明确的合适制剂、储存条件和临床操作方法，感染性滴度很有可能损失。在基于重组人体巨细胞病毒载体（rHCMV-1）的HIV-1候选疫苗的初步工艺开发中，在于4℃储存并冻融后，可观察到较大的载体滴度损失。所以，原文研究的目的是针对早期临床试验中的潜在使用，开发rHCMV-1的候选冻存液体制剂，以优化冻融和短期液体稳定性。

为此，研究人员开发了一种病毒稳定性筛选程序，包括使用一种基于细胞的快速、体外免疫荧光聚焦方法，以定量病毒滴度。实验评估了包括~50种赋形剂的数据库，以确定其对冻融循环或持续数天的4℃孵育后病毒载体稳定的影响。特定的添加剂包括糖和聚合物以及去除NaCl，以保护rHCMV-1避免冻融导致的病毒滴度损失。优化的溶液条件降低了rHCMV-1在4℃液体状态中的损失速率。评估了多种赋形剂组合后，设计了三种新的候选剂型。从降低rHCMV-1在5次冻融循环或30天4℃孵育后滴度损失来看，新候选剂型的稳定性显著提升。新剂型的开发有助于更快地开展早期临床试验。

文中，在生产rHCMV-1时，病毒感染于细胞工厂中培养的DAXX-siRNA转染的MRC-5细胞，感染后12天，进行第二次DAXX-siRNA转染，置换培养基。达到完整细胞病变效应（CPE）后，收获上清液，离心澄清去除较大的细胞碎片，然后再以超滤和洗滤纯化。澄清的病毒上清液先浓缩20倍，使用膜表面积1000cm²、孔径50nm、内径0.5mm的聚砜材质MiniKros^®中空纤维组件，之后再以切向流过滤方式立即换液12.5体积的TNS缓冲液，两步操作中剪切均为2400S-1，平均TMP维持为1.5psi。鉴定物料的无菌性、遗传一致性以及抗原表达。病毒储存于-80℃，以做后续试验准备。

原文：O.S.Kumru, S. Saleh-Birdjanis, L.R.Antunez, et al., Stabilization and formulation of a recombinant Human Cytomegalovirus vector for use as acandidate HIV-1 vaccine. Vaccine, 2019, 37: 6696-6706.

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