sapphire检测残留的宿主细胞蛋白HCP的方法

许多生物制品例如抗体，重组蛋白，疫苗等的制备还是通过生物体系细胞工程合成，尽管采用多种纯化方式，在生物药物中还会有微量的宿主蛋白残留（HCP），会对药品的安全性及药性产生影响。

一、HCP的概念

HCP：Host cell protein，宿主细胞蛋白

疫苗、抗体、重组蛋白药物等生物制品的生产主要利用某些细胞诸如非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）和中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，大肠杆菌等材料，这些细胞称为宿主细胞。

在纯化工艺中会有宿主细胞分泌至培养基中的蛋白质或死亡破碎细胞的结构蛋白残留在生物制品中，这些蛋白被称为宿主细胞蛋白。例如vero细胞HCP是指疫苗中来源于宿主细胞蛋白和转化蛋白，以vero细胞为基质细胞生产疫苗的过程是将病毒接种于vero细胞，病毒利用细胞环境复制自身，同时导致宿主细胞结构受损、死亡，释放大量

的宿主细胞结构蛋白于疫苗中，这部分蛋白有可能成为疫苗中的过敏原vero细胞生长的同时向培养液中释放生长因子等促生长蛋白，可引起细胞的增值和分化，vero细胞结构蛋白和促生长蛋白构成了宿主细胞蛋白。

• 为什么要检测残留HCP

· 生物制品中残留的宿主细胞蛋白（HCP）作为外源蛋白可能在不同程度上引发机体的免疫应答，最终导致过敏反应或其他不良反应--例如发热、水肿，甚至休克等同时人体的免疫应答性质和效果，会受到HCP浓度，数量和个体免疫系统差异而不同，药物监管部门最关注用药者的安全性，所以HCP的监控检测变得越来越重要。

· 《中华人民共和国药典》明确规定，CHO细胞残余蛋白占总蛋白含量要小于0.05%以下才符合规定。

· 美国FDA规定，用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCP，其含量应该低于检测限（通常小于100ppm）

三、残留HCP的检测方法

·SDS-PAGE

·2D电泳

·蛋白质印记（western blot）

·酶联免疫吸附实验（ELISA）

·高效液相层析（HPLC）

四、基于Sapphire的残留HCP检测

首先采用2D 双向电泳技术高校分离HCP，一块胶跑宿主细胞全蛋白2D电泳，之后染色使用sapphire仪器进行扫描成像，另一块胶跑生物制品的2D电泳，然后将胶上蛋白转移至膜上，经过封闭，一抗，荧光二抗杂交，使用sapphire进行western blot荧光信号采集，通过结合2D 电泳和wesern blot结果比对鉴定，相比传统的单独的ELISA和WB方法，2D 电泳和WB技术能够更为全面精准的鉴定微量的HCP

五、应用领域

检测疫苗等蛋白药物中残余的HCP类别和残留水平

检测重组蛋白中残余的HCP类别和残留水平

鉴定抗体产物中残余的HCP类别和残留水平