酵母β-葡聚糖含量化学比色法定量检测试剂盒产品使用说明书

酵母β-葡聚糖含量化学比色法定量检测试剂盒产品使用说明书

主要用途

YIJI 酵母β-葡聚糖含量化学比色法定量检测试剂是一种旨在通过染料刚果红与β-D-葡聚糖结合沉淀，产生吸光峰值的变化，来测定样品中β-葡聚糖浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种培养酵母菌种β-葡聚糖的含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

β-D-葡聚糖（β-D-glucan）是一种葡萄糖单体通过β-1,3或β-1,4主链和β-1,6侧链上的糖苷键（glycosidic bond）链接而成的多聚体葡萄糖分子，普遍存在于植物中纤维素（cellulose）、谷粒外皮、以及藻类、真菌、酵母、蘑菇或细菌的胞壁等。其中β-1,3-D葡聚糖更为常见，具有生物活性和药物特性，包括免疫刺激、抗炎、抗菌、抗传染、抗癌、降低胆固醇、放射线的保护及伤口愈合等活性。β-D-葡聚糖的测定包括苯酚-硫酸法、刚果红法、苯胺蓝法和酶连续反应法等，其中刚果红法作为比色定量技术，操作非常方便。基于β-D-葡聚糖，与刚果红（Congo red；benzidinediazo-bis-1-naphthylamine-4-sulfonic acid）反应产生沉淀复合物，呈现吸光峰值的降低（波长540nm），由此定量测定β- D-葡聚糖的含量。

产品内容

YIJI 萃取液（Reagent A）   毫升

YIJI 稀释液（Reagent B）      毫升

YIJI 反应液（Reagent C） 毫升

YIJI 标准液（Reagent D） 毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存 YIJI 标准液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4冰箱里；YIJI反应液（Reagent C）避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于标准液配制或反应的容器

（微型）台式离心机：用于样品操作

电炉：用于煮沸孵育

比色皿或酶标板：用于染色后比色检测的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

 样品准备

• 准备好5毫升待测的新鲜酵母细胞（OD600＝1.0，即1 X 10⁸细胞/毫升）
• 移入到15毫升锥形离心管
• 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 涡旋震荡15秒
• 煮沸水浴里孵育5分钟
• 涡旋震荡15秒
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 涡旋震荡15秒
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 涡旋震荡15秒
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI  稀释液（Reagent B），混匀
• 置于冰槽里备用

• 测定准备

• 准备好待测样品，置于冰槽里
• 设定好分光光度仪或酶标仪（温度为25℃）：波长540nm，并置零 
• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 按照下表配制标准液
• 将1至5号管置于室温下备用；标准管浓度见下表

 

管号	YIJI 稀释液（Reagent B）	YIJI 标准液（Reagent D）	标准葡聚糖含量
1	――	xx微升	xx微克
2	xx微升	xx微升1号管	xx微克
3	xx微升	xx微升2号管	xx微克
4	xx微升	xx微升3号管	xx微克
5	xx微升	0	0

• 标准曲线测定

• 加入500微升上述配制的标准液到1.5毫升离心管
• 加入xx微升YIJI 反应液（Reagent C）
• 涡旋震荡15秒
• 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶标板
• 即刻放进分光光度仪检测：获得相对吸光读数
• 重复实验步骤1至6四次
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对吸光单位；横座标（X轴）为标准葡聚糖含量（微克）

• 样品测定

• 加入500微升上述制备的待测样品到1.5毫升离心管
• 加入xx微升YIJI 反应液（Reagent C）
• 涡旋震荡15秒
• 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶标板
• 即刻放进分光光度仪检测：获得相对吸光读数
• 根据标准曲线获得样品对应葡聚糖含量

• 计算样品浓度

注意事项

• 本产品为25次操作，包括标准样
• 本产品检测范围是100至300微克葡聚糖
• 操作时，须戴手套
• 比色测定后，比色皿须清洗彻底
• 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
• 本公司提供系列葡聚糖检测相关试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感