大肠杆菌裂解液澄清，收获胞内表达蛋白

简介

从大肠杆菌裂解液中分离细胞内表达的蛋白质。目的蛋白具有抗肿瘤潜力。

工艺条件

裂解液体积为245升。使用一根0.2 μm 的Krosflo^® 组件进行批量分离，膜表面积为1.0m² 。流路见图1所示，料液的循环速率保持57L/min。先开始料液循环，然后缓慢打开滤液端口。不限制下游循环。起始处理温度为4°C，并缓慢升至12°C直到运行结束。起始进样压力为12psig，因为升温，料液粘度下降，压力下降至11 psig，而后又因为运行结束前固体颗粒浓度增加而上升至13 psig。

图 1. 大肠杆菌裂解液过滤流路系统设置

图2. 大肠杆菌裂解液过滤通量和滤液总体积 vs. 时间

结果

作为典型的细菌裂解液，流量衰减曲线开始迅速降低，并快速达到稳定。在65min内共收集237L含目的蛋白的滤液。工艺平均通量为~200L/m²/hr，目标蛋白的通过率为99%。

讨论

选择合适的过滤组件以及工艺条件对于有效地从细胞裂解液中分离感兴趣的目的成分是必需的。瑞普利金Krosflo® 过滤组件是从细胞裂解液中分离可溶性蛋白的最佳选择。如使用一次性预灭菌过滤器进行处理，可避免过滤器清洗不足的问题。过滤器不再会造成批次之间的污染，并保证每次处理的高效率。

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