轻松纯化His标签胞外分泌蛋白

从真核细胞上清液中纯化蛋白是一项繁琐的工作。通常情况下胞外分泌蛋白的浓度很低，且蛋白很容易被细胞上清液中的蛋白酶降解。
 
当然，Cube Biotech实验室也面临同样的问题。然而一天，Cube Biotech的科学家想到是否我们可以把磁珠直接加入溶液，从平衡体系中分离出带His标签的蛋白？通过尝试，整个纯化过程变得比以前更加容易。因此，我们开发了一个新的方法来纯化分泌在胞外的His标签蛋白。
 
当然，新的方法能够成功也是因为Cube Biotech所有的亲和纯化磁珠：NTA，IDA，和新的INDIGO系列产品都可以通过高温蒸汽灭菌锅处理。有兴趣尝试我们新方法用于下一次表达的His标签胞外分泌蛋白？请参看我们如下的操作流程。
 
 

1、拿一小瓶PureCube His标签亲和磁珠（Ni-INDIGO、Ni-NTA、Ni-IDA）移去保护液并添加同体积PBS后用高温蒸汽灭菌处理。

2、在培养瓶中装入细胞培养液并接种细胞。

3、在培养瓶中加入高温蒸汽处理过的100μl（25%含量）的磁珠到50ml培养液中。磁珠用量也可以通过蛋白表达量来计算。

4、在培养瓶外贴上磁铁后按照通常的方法培养细胞。当带His标签的蛋白分泌到上清液后将会被磁珠捕获。

5、需要收集蛋白时，将培养液取出并用清洗液清洗固定在培养瓶壁上的磁珠。

6、去掉磁铁后将磁珠转移到一个干净的小管内。

7、加入洗脱液反应后将洗脱液转移到另一个干净的小管内。

8、洗脱液中含有纯化出的带His标签的目标蛋白。