CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是研究DNA与蛋白互作的新技术。与ChIP-Seq相比,CUT&Tag不需要甲醛交联和免疫共沉淀的过程,而是通过靶蛋白的抗体和Protein A的介导,使Protein A融合的Tn5转座酶靶向并切割DNA,同时在序列两端加上测序接头,经PCR扩增后形成高通量测序文库。
优点:
灵敏度高;重复性好
实验流程图:
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细胞与ConA beads结合——细胞渗透性处理——一抗与目的蛋白特异性结合——二抗结合一抗放大信号——加入pA-Tn5与抗体结合——通过Mg2+激活转座体,片段化目的蛋白结合的DNA,并加上接头序列——DNA提取与扩增-高通量测序
客户提供材料 |
交付结果 |
冻存细胞:细胞数>10万
冻存组织:组织量>40 mg
一抗(请使用ChIP级别的一抗,提供未稀释的抗体原液,
送样前请将抗体的说明书发给我们,以便安排后续实验)
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实验过程图
高通量测序原始数据
生物信息学分析结果
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CUT&Tag数据:
使用CUT&Tag,鉴定H3K27me3在染色质水平上的peaks。与ChIP-seq相比,在相同Reads条件下,两者的Peaks一致,并且CUT&Tag的信噪比更高、背景更低。
bio-equip.com
技术服务:
1、DAP-seq:高通量检测转录因子或DNA结合蛋白在基因组上的结合位点。
2、酵母单杂交:研究
蛋白质和特定
DNA序列相互作用。
3、酵母双杂交:检测已知蛋白质之间的相互作用,鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白。
4、EMSA:鉴定或验证DNA结合蛋白和DNA序列的相互作用。
5、ChIP-seq:高效检测重组蛋白、转录因子在基因组的结合位点。
6、DAP-seq与RNA-seq联合分析: 分析转录因子的靶基因在RNA-seq数据中的表达变化,深入挖掘DAP-seq和RNA-seq测序数据,增加转录组测序的分析深度。
7、DNA-pull down:鉴定与DNA结合的蛋白。
欢迎企业和课题组洽谈合作,电话:15632249798(微信同号),QQ:2522026793