miRNA表达检测,茎环引物设计合成,荧光定量PCR,Northern blotting
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服务商: 北京阅微基因技术有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
背景介绍
MicroRNA(miRNA)是一类长度约19-24nt的非编码单链RNA,通过碱基互补配对的方式与靶基因的3’-UTR区部分或完全互补,剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译,从而起到转录后调控靶基因表达的作用。它广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中,调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达。MiRNA的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生,在多种癌症中,miRNA的表达水平会发生明显改变,有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外,在许多其他的病变组织和细胞中也检测到了miRNA的异常表达。因此对miRNA的表达的研究具有重要意义。
阅微基因的技术人员通过4年的探索和努力,在miRNA表达检测方面积累了丰富经验,探索出多种有效的实验方法,为您提供全面和优质的miRNA表达检测服务。
服务编号 | 服务项目 | 内容说明 | 周期 |
MIR01 | 实时定量PCR检测 | 反转录和上机检测 | 1-4周 |
MIR02 | MicroRNA Array | 用荧光定量方法进行 miRNA表达谱分析 | 2-4周 |
MIR03 | 特定类型疾病miRNA表达检测 | 检测肝癌、胃癌等疾病的 标志性miRNA | 1-3周 |
MIR04 | Northern Blotting | 同位素标记探针进行 miRNA的Northern杂交 | 8-12周 |
MIR05 | miRNA引物设计合成 | 设计并合成用于miRNA表 达检测的高质量引物 | 1周 |
MIR06 | miRNA探针制备 | 用于Northern杂交的探针 | 2周 |
运用成熟的实时定量PCR技术准确、快速地定量检测各种组织、原代细胞及细胞系中目的microRNA的表达情况,具有灵敏度高、实验周期短和特异性高等特点,实验结果见图1和图2。
图1 目的miRNA和内参(U6 snRNA)的扩增曲线(仪器为Roche LC 480)
图2 目的miRNA和内参(U6 snRNA)的熔解曲线(仪器为Roche LC 480)
2.MicroRNA Array
利用集成在384孔板上的引物和探针组合来检测人类、大鼠或小鼠的miRNA表达谱,只需1个工作日就能产生覆盖Sanger miRbase的综合数据集。采用TaqMan探针原理,结果准确可靠,样品无需做重复试验。
3.特定类型疾病miRNA表达检测
MiRNA的表达检测对监测肿瘤的发生发展和各种治疗手段的效果有重要意义,作为指导个体化药物选择的生物标记具有很大的临床应用潜力。我们针对肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤相关标志性miRNA进行荧光定量检测。
送样要求
细胞(≥106)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,总RNA(≥20μl,浓度≥ 50ng/μl)。
提供结果
服务编号 | 内容 |
MIR01 | 引物(或探针)及序列、反转录胶图、原始qRT-PCR数据和实验报告 |
MIR02 | 原始数据和实验报告 |
MIR03 | 原始数据和实验报告 |
MIR04 | 杂交探针序列、探针、目的microRNA及内参U6 snRNA杂交图片及条带灰度扫描结果 |
相关技术服务 | ||
服务编号 | 服务项目 | 内容说明 |
EXT04 | RNA提取 | 从血液、组织、叶片等样本材料中提取总RNA |
EXT05 | 血清RNA提取 | 从1-5ml血清中提取总RNA |
EXT06 | 石蜡包埋组织RNA提取 | 从石蜡包埋的组织块中提取总RNA |
相关产品 | |||
名称 | 品牌 | 规格 | 说明 |
反转录试剂盒 | Microread | 25/100次 | 高效的逆转录酶,RNAase H 活性弱化,得率更高 |
加A法反转录试剂盒 | Microread | 25/100次 | 对miRNA末端加A后进行反转录 |
SYBR荧光定量试剂盒 | Microread | 1/5/10ml | 采用了化学修饰Taq酶,特异性 很好,性价比高 |
快速qPCRKit(SYBR法) | KAPA BIO | 1/5/10ml | 能够在40分钟内完成反应,同时 保证扩增效率和特异性 |
快速qPCR Kit(TaqMan探针法) | KAPA BIO | 1/5/10ml |
成功案例
miRNA在癌症的发生过程发生重要作用,某医院客户研究病例组和对照组的miRNA表达差异,以便确认在该机制发生过程中miRNA是否起到调控作用。
我们的优势
1. 使用定量PCR仪中最稳定和常用的ABI7900HT、LC480。
2. 核心试剂采用美国原装进口KAPA试剂,实验结果准确,重复性好。
3. 丰富的qPCR经验基因类别有DNA、mRNA、miRNA,物种类别有人、鼠、鸡、牧草、酵母菌、金黄色葡萄菌、病毒上清液等等。