诺瓦克病毒(Norwalk Viruses,NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。此后,世界各地陆续自胃肠炎患者粪便中分离出多种形态与之相似但抗原性略异的病毒样颗粒,均以发现地点命名,如:Hawaii Virus(HV)、Snow Mountain Virus(SMV)、Mexico Virus(MxV)Southampton Virus(SOV)等,先是称为小圆结构病毒(Small Round Structural Virus,SRSV),后称为诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus,NLV),直至2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒(Norovirus,NV)。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒(Sapporo-like Virus,SLV),现在的正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV),合称为人类杯状病毒。
NV基因组是单股正链 RNA,全长约7642nt,包括3 个开放阅读框(Open Reading Frames,ORFs)。ORF1编码包括保守的具有RNA 多聚酶在内的非结构蛋白;ORF2 编码分子量约为 56Kda的衣壳蛋白;ORF3 编码一种分子量约为 22.5Kda 的强碱性微小结构蛋白。Pamela等人研究发现ORF3表达的部分区域蛋白与衣壳蛋白发生交互作用,共同形成衣壳。
NV病毒成员庞杂,目前已对其 100 多个分离株进行基因测序。核酸的同源性分析表明,世界不同地区、不同时间流行的NV基因RNA多聚酶区序列相对保守,核苷酸氨基酸序列同源性高于60%,有的达到90%以上。因此,根据 RNA 多聚酶区核苷酸序列的相似性,将 NLV 分为 5 个基因组,其中感染人的包括基因组Ⅰ、Ⅱ和IV:基因组Ⅰ,以 Norwalk virus(NV)为代表,包括Southampton(SOV)、Desert Shield virus(DSV)等;基因组Ⅱ,以 Snow Mountain virus(SMV)代表,包括 Hawaii Virus(HV)、Mexico Virus(MxV)、Lordsdale virus(LV)等;最近在动物体中发现了感染猪和奶牛的基因组属于基因组III和V。
实验室检查
电镜法:直接电镜法(EM)和免疫电镜法(IEM),EM 法观察的灵敏度较低,要求每毫升粪便样品中至少有大约 106个病毒粒子,因此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。IEM 法比 EM 法的敏感性可提高 100 倍,主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原,从而增加检出率。电镜法的缺陷在于设备昂贵,不能广泛普及;检测结果与操作者的技能和经验有直接关系;灵敏度相对较低;不适于大规模流行病学调查。
免疫法: 包括放射免疫法(RIA)、生物素-亲和素免疫法(Biotin-Avidin Immunoassy)和酶联免疫法(ELISA)。RIA法的灵敏度比IEM 法可 提高10~100倍,可以检测出抗体升高的水平,为流行病学提供更有参考价值的资料。RIA 法的不足之处在于它需要 6 d,且需要放射性同位素标记。
分子生物学检测方法
杂交技术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)除了能更准确、灵敏地检测标本中的NV,尤其是低浓度的NV感染外,最大的优点在于可以进一步对病毒进行基因型的研究,不会受到获得分型单克隆抗体的限制,对流行病学研究具有重要意义。
诺克奥公司开发的诺若NV病毒基因检测试剂盒技术充分利用了病毒分子生物学领域的最新发现和目前亚洲NV病毒流行病的信息,在短时间内准确快速的检测NV病毒基因,有效的为公共卫生机构和医疗机构提供可靠的病毒检测资料,尽快查清病毒传染源,有效的控制NV病毒的进一步传播。
诺克奥NV病毒一步法RT-PCR检测试剂盒适用于诺若NV病毒RT-PCR基因检测。该试剂盒包含浓度为2X的二合一聚合酶,dNTPs, MgCl2, 反应缓冲液,諾若NV 病毒基因PCR引物,RT-PCR反应增强剂, PCR反应优化剂和酶稳定剂。具有使用快速简便,灵敏度高,特异性强,稳定性好等特点。
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