将委托方提供的DNA显微注射到150个受精卵。注射后的受精卵移植到5至6只代孕母鼠输卵管中。小鼠出生后3周,取其尾巴送至委托方手中作PCR鉴定。如果每个DNA没有获得至少3个首代转基因小鼠,则免费继续注射100个额外的受精卵。如果第二次注射后仍未获得首代转基因小鼠,将不再进行显微注射,平台将与委托方讨论进一步的措施。出生后4周,将小鼠隔离并送交委托方。
联系人:丁小燕研究员 董娟
联系电话:021-54921411 54921358
E-mail: xyding@sunm.shcnc.ac.cn, dongjuan@sibs.ac.cn
成功案例介绍:
委托方提供线性化DNA LFM1a ,2009年3月12日和13日第一批注射62个受精卵,移入4个代孕母鼠输卵管中,其中3只受体鼠怀孕并生产,获得小鼠11只,将11只小鼠剪尾抽提基因组DNA,经PCR鉴定,获得6只转基因阳性小鼠,如图所示。
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干细胞技术平台作为生物化学与细胞生物学研究所核心平台的成员之一,在研究所加强发展技术支撑工作的背景下,于2006年10月正式成立(http://www.sibcb.ac.cn/cp13-2.asp)。平台现有细胞培养室4间,其中2间为百级净化工作间,其内配备有百级净化工作台、CO2培养箱、冰箱、倒置相差显微镜、台式低速离心机等基础设施。平台现有饲养层细胞如昆明白、CF-1、ICR、等多种品系小鼠的饲养层细胞,带有单抗性基因(抗G418、嘌呤霉素)的饲养层细胞,带有四抗性基因(抗G418、6-thioguanine, puromycin 和hygromycin )的饲养层细胞,人包皮成纤维细胞;有小鼠胚胎干细胞系如R1、E14、CE-3、D3;有小鼠的iPS细胞系;有人胚胎干细胞系如HN4。平台还备有工具小鼠如CF-1、ICR、Neo、NOD/scid、Rosa 26 (β-gal)等。平台现具备的能力:1)小鼠胚胎干细胞基因操作如同源重组、随机插入等,建立稳定的细胞系。2)小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞定向分化操作能力。3)转基因小鼠制备。目前,平台可为所内外提供胚胎干细胞相关技术培训和技术服务。