酵母表达纯化服务-真核蛋白表达

背景简介

　　酵母表达系统具有原核和高等真核表达系统的优点，是真核表达蛋白的常用系统之一，其中毕赤酵母表达系统是常用的、有效的表达系统之一，它具有以下优势：①拥有目前更强，调控机理严格的启动子之一醇氧化酶基因AOX1启动子，非常利于外源基因的表达调控；②具有翻译后的蛋白加工修饰功能例如磷酸化、糖基化等等，高度还原目的蛋白；③表达的目的蛋白的可溶性高；④外源基因可以单拷贝或者多拷贝的形式在特定的位点整合进酵母染色体上，伴随着染色体的复制而复制，有较高的遗传稳定性；⑤既可以在细胞内表达，也可在细胞外表达。
 

实验流程

　　1、密码子优化：确保基因转录、mRNA翻译以及翻译后修饰的正常进行；
　　2、载体构建并转化表达菌株：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；载体线性化处理；转化酵母表达菌株：
　　3、高表达酵母菌株鉴定筛选：PCR筛选阳性克隆并测序鉴定，SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同菌株的表达情况，挑选适合用于目的蛋白表达的酵母表达株系；
　　4、蛋白表达分析鉴定：将挑选的酵母表达株系进行小量表达检测；
　　5、蛋白表达条件优化：根据小量表达检测结果，优化培养基以及诱导条件（菌的浓度，诱导剂的浓度，诱导时间等等），提高目的蛋白的表达量；
　　6、放大培养和纯化：选择更佳的诱导表达条件放大目的蛋白表达菌株的培养并纯化目的蛋白；
　　7、目的蛋白检测及浓度测定：Western Blot检测目的蛋白；测定蛋白浓度。

 

服务优势

　　两种表达类型可供选择：胞内蛋白表达和分泌蛋白表达；
　　目的蛋白还原度高：具有翻译后的蛋白加工修饰功能；
　　多种载体以及表达菌株可供选择；
　　团队经验丰富。

安徽中科圣安生物技术有限公司总部位于安徽省合肥市，核心团队成员由分子生物学、免疫学、细胞学等领域的博士硕士组成，由在国内科研领域有着多年从业经验的专业技术团队和企业管理团队组建而成，中科圣安生物一直秉承着“以人为本、诚信与品质”的发展理念。 　　中科圣安生物立足于生命科学，为基础生命科学研究领域的科学工作者提供生物学先进技术服务，公司以TurboID邻近标记(Proximity labeling, PL)技术为核心基础，致力于为科研工作者定制目标蛋白质互作网络数据库，为系统地解析蛋白质的功能，揭示生命体的奥秘提供了有力且可靠的技术支持。 　　同时，公司依靠自身的优势，还为科学工作者提供分子生物学技术服务，主要业务包括：酵母双杂交一对一互作验证；GST下拉实验（GST-pull down assay）;免疫共沉淀（co-Immunoprecipitation，co-IP）；双 分 子 荧 光 互 补 实 验 （ Bimolecular fluorescence complementation, BiFC）；荧光素酶互补成像技术（Luciferase complementary imaging，LCI）；凝胶阻滞实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）；亚细胞定位（观察蛋白的定位情况）；TurboID邻近标记技术构建蛋白互作网络数据库等等。