荧光素酶互补成像技术 LCI

原理简介

　　萤火虫荧光素酶片段互补成像技术（LCI）是近年来形成的研究蛋白互作的新技术，把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 （CLuc：398–550 aa)和N端（NLuc：2–416aa）。如果2个蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的荧光素酶，荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。
　　将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相互作用。该技术具有很多优势：1、可以实现活体细胞内实时、定量分析；2、不受植物自发荧光的干扰；3、不需要裂解细胞提取蛋白质，可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。

实验流程

　　荧光素酶互补成像（LCI）实验流程图

　　①植物表达载体构建（融合蛋白）：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定；

　　②转化农杆菌：将目的载体转化到农杆菌菌株内，例如：GV3101；
　　③注射烟草：将含有CLuc与NLuc的农杆菌菌液按照比例混匀，共同注射本氏烟叶片；
　　④定量、定性分析；
　　⑤检测目的蛋白的表达；
　　⑥分析结果并完成交付。

　　技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用
　　技术服务优势：
　　①团队经验丰富；
　　②提供原始图片，保证数据真实可靠；
　　③该技术得到的蛋白互作关系符合体内实际情况，结果可信度高；
　　④可定性、定量分析蛋白互作关系。

安徽中科圣安生物技术有限公司总部位于安徽省合肥市，核心团队成员由分子生物学、免疫学、细胞学等领域的博士硕士组成，由在国内科研领域有着多年从业经验的专业技术团队和企业管理团队组建而成，中科圣安生物一直秉承着“以人为本、诚信与品质”的发展理念。 　　中科圣安生物立足于生命科学，为基础生命科学研究领域的科学工作者提供生物学先进技术服务，公司以TurboID邻近标记(Proximity labeling, PL)技术为核心基础，致力于为科研工作者定制目标蛋白质互作网络数据库，为系统地解析蛋白质的功能，揭示生命体的奥秘提供了有力且可靠的技术支持。 　　同时，公司依靠自身的优势，还为科学工作者提供分子生物学技术服务，主要业务包括：酵母双杂交一对一互作验证；GST下拉实验（GST-pull down assay）;免疫共沉淀（co-Immunoprecipitation，co-IP）；双 分 子 荧 光 互 补 实 验 （ Bimolecular fluorescence complementation, BiFC）；荧光素酶互补成像技术（Luciferase complementary imaging，LCI）；凝胶阻滞实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）；亚细胞定位（观察蛋白的定位情况）；TurboID邻近标记技术构建蛋白互作网络数据库等等。