同源重组胚胎干细胞建系——将线性化同源重组质粒电转到小鼠胚胎干细胞系R1中;进行筛选、扩增、挑取克隆。扩增后Southern blot筛选正确的同源重组克隆。
鉴定后为阳性的克隆由平台技术员扩增。干细胞平台为客户保种。
嵌合体小鼠制备——将正确重组的胚胎干细胞显微注射到小鼠囊胚中,显微注射后的囊胚回送到代孕母鼠输卵管或子宫中。至少提供5个嵌合率大于50%的嵌合体小鼠给客户。但是我们不保证其具有生殖系统传递的能力。
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干细胞技术平台作为生物化学与细胞生物学研究所核心平台的成员之一,在研究所加强发展技术支撑工作的背景下,于2006年10月正式成立(http://www.sibcb.ac.cn/cp13-2.asp)。平台现有细胞培养室4间,其中2间为百级净化工作间,其内配备有百级净化工作台、CO2培养箱、冰箱、倒置相差显微镜、台式低速离心机等基础设施。平台现有饲养层细胞如昆明白、CF-1、ICR、等多种品系小鼠的饲养层细胞,带有单抗性基因(抗G418、嘌呤霉素)的饲养层细胞,带有四抗性基因(抗G418、6-thioguanine, puromycin 和hygromycin )的饲养层细胞,人包皮成纤维细胞;有小鼠胚胎干细胞系如R1、E14、CE-3、D3;有小鼠的iPS细胞系;有人胚胎干细胞系如HN4。平台还备有工具小鼠如CF-1、ICR、Neo、NOD/scid、Rosa 26 (β-gal)等。平台现具备的能力:1)小鼠胚胎干细胞基因操作如同源重组、随机插入等,建立稳定的细胞系。2)小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞定向分化操作能力。3)转基因小鼠制备。目前,平台可为所内外提供胚胎干细胞相关技术培训和技术服务。