微滴式数字PCR（Droplet digital PCR），又称为“油包水PCR”或“ddPCR”。在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。微滴式数字PCR技术不仅有效提高了核酸分子的扩增效率，而且由于采用微滴计数的方法进行定量，从根本上突破了基于荧光强度进行定量的技术限制，并可对所测样品中的核酸分子进行绝对定量。数字PCR的检测灵敏度相比普通RT-PCR提高了10-100倍，样本用量也减少了10倍以上。
| 华盈生物数字PCR服务
基于数字PCR在灵敏度上的绝对优势，在外泌体RNA这种ng级微量样品的检测和验证时尤为适用。当外泌体RNA量较少时，数字PCR可以在0.1ng的基础上进行稳定检测，而普通RT-PCR的检测起始量一般在1ng左右，很难完成多个基因的检测工作。华盈生物将数字PCR纳入到外泌体RNAs（miRNA、mRNA、lncRNA和circRNA）测序验证和独立检测实验中，并建立了严谨可靠的技术路线，为获得可靠的数字PCR数据提供了保障，具体服务流程如下：
| 经典案例：发现外泌体miRNA标志物：SmallRNA测序+数字PCR
在56例血浆外泌体中通过Small RNA测序技术筛选，研究人员发现6种miRNA在子宫内膜癌与健康对照间存在显著差异。该6种miRNA形成的组合对于子宫内膜癌的诊断效能AUC达到0.983。进一步通过与TCGA数据库比对，发现这6种miRNA在肿瘤组织中的表达趋势与血浆外泌体一致。
为节约样本，研究人员采用了灵敏度更高的微滴数字PCR技术，对202例独立血浆样本进行了验证，结果显示3种miRNA可以完全验证测序结果。将这3种miRNA与传统标志物TB形成组合，能够将子宫内膜癌的诊断效能AUC提高到0.904。并且对于早期（Stage I ）的子宫内膜癌的诊断效能AUC可达到0.915。
| 相关文献
[1]. Lanyun Zhou, Wei Wang, Fenfen Wang, et al. Plasma-derived exosomal miR-15a-5p as a promising diagnostic biomarker for early detection of endometrial carcinoma. Mol Cancer. 2021 Mar 29;20(1):57. IF=27.401
[2]. Shi-Ji Li, Zhi-Wen Cai, Hong-Fu Yang, et al. A Next-Generation Sequencing of Plasma Exosome-Derived microRNAs and Target Gene Analysis with a Microarray Database of Thermally Injured Skins: Identification of Blood-to-Tissue Interactions at Early Burn Stage. J Inflamm Res. 2021:14 6783–6798. IF=6.922
[3]. Zhiwu Dong, Hongjun Gu, Qiang Guo，et al. Profiling of Serum Exosome MiRNA Reveals the Potential of a MiRNA Panel as Diagnostic Biomarker for Alzheimer's Disease. Mol Neurobiol. 2021 Jul;58(7):3084-3094. IF=5.590
