病理技术平台----骨组织脱钙

      一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。柠檬酸盐是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经柠檬酸盐脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。
操作步骤(仅供参考)：
1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 
2、 组织固定后，用PBS清洗。 
3、 组织用蒸馏水洗清洗。 
4、 组织转移至20~30倍体积的脱钙液。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。 
5、 用蒸馏水冲洗数次。 
6、 常规脱水、包埋。
注意事项： 
1、 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙即可，大多数在14～60天即可。
2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃。
3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 
4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 
5、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 

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