昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作,简称为P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒,P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统适合于膜蛋白的重组表达,4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情,卡梅德生物科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品。
昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一,具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点,重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。
卡梅德生物(KMDTM Bioscience)可以为客户提供整套的蛋白表达方案,我们免费对客户提供的基因进行序列分析测;同时根据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。我们的优势还体现在,我们的团队成员具有多年的重组蛋白和抗体的制备经验,我们熟悉不同蛋白的表达特性,如膜蛋白表达,内源性蛋白表达以及分泌性蛋白表达,同时我们GMP/GLP 生产级实验室和严谨的符合临床注册原则的文件记录体系,能为您的蛋白产品保驾护航。
服务优势:
--密码子优化:包含稀有密码子分析,蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析
--多种融合标签载体和宿主,以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性
--多种规模蛋白发酵模式:小规模(500ml,2.5L,10L和30L)、大规模(80L,130L和250 L发酵罐)
--短时间内制备高纯度毫克级,克级重组蛋白
--低内毒素:LAL检测法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撑体系,保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯
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卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家级高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
核心平台:
---噬菌体抗体展示技术平台
卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供极具性价比的重组Vhh抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
---抗体工程技术平台
卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。
单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,最快能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。
多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自卡梅德生物的资深抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。
抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供DeNovo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。
抗体改造技术平台:卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。
---蛋白表达与纯化服务技术平台
卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供全面且优质的蛋白表达技术服务。
哺乳动物表达平台: 目前公司拥有FreestyleCHO,ExpiCHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,远高于市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供高纯度蛋白。
昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台,我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白,包括多种GPCR家族成员蛋白。
原核蛋白表达平台
酵母蛋白表达平台:毕赤酵母,酿酒酵母等蛋白表达体系,适用于需要真核表达蛋白,同时兼具产量与性价比的项目需求特点。
植物表达平台:为了提供更好的服务,卡梅德生物携手国内顶尖科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务,项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度,高质量的植物来源的蛋白,已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。
---蛋白批量发酵与纯化平台
超高密度发酵技术:卡梅德生物科技能够为客户提供5L,10L,30L,80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务(微载体贴壁培养技术),人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml,非常适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵,能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台,我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。
同时,借助有氧发酵技术,我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务,采用有氧发酵类型的原核发酵技术,蛋白产量远高于传统的原核发酵(相差接近100倍蛋白产量和得率)
蛋白纯化技术平台:我司分别配制了Akta和BioRadBiological的蛋白纯化仪,同时拥有GE全套填料,包括Sphedax75/200,500,G25,G100,CMFF,Q-FF,DEAE以及不同规格的预装柱等,能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业,硕士博士学历占比98%,因此有能力为客户提供快速,高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。
---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台
稳定细胞系构建平台:卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务,如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默,敲除,过表达等稳定细胞系;同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染(Lipofectin2000/3000)的稳定转染细胞系构建服务,如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。
卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆,蛋白定量,免疫印迹检测(SDS-PAGE、WB),宿主核酸检测,蛋白抗体亲和纯化,ELISA操作,内毒素检测,HPLC分析,免疫组化,IP,免疫浊度,流式细胞术等服务。