冷冻干燥菌种转接技术的操作方法与注意事项！

                                 冷冻干燥菌种转接技术的操作方法与注意事项！
 

建议用下列方法恢复培养冷冻干燥保藏的菌种。
 
一、安瓶管开封
 
1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。
 
2、用火焰将安瓿管顶端加热。
 
3、滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。
 
4、用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。
 
二、菌株恢复培养
 
1、用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。
 
2、取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。
 
3、若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。
 
三、注意事项
 
1、菌种活化前，请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。
 
2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。
 
3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长，此时请将步骤二(2)重复一次。
 
液氮超低温保藏程序：
 
1、容器的选择：使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。
 
2、检查安培瓶是否渗漏：用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟，冲洗干净，弃去含有蓝色染料的安培瓶，其余的安培瓶备用。
 
3、打印标签(激光打印)。
 
4、容器的灭菌：先用蒸馏水漂洗干净安培瓶，再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟，干燥并将打印好的标签放入安培瓶中，略拧紧螺旋盖，再行121℃灭菌30分钟。
 
5、保藏菌菌龄：处于最大生长量阶段或对数生长期后期。
 
6、保护剂：选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。
 
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