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液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定方法！
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液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定方法！
芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验，传统的芽管检测的试剂多为动物血清。我们研制了一种液体染色培养基，用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子，临床应用效果良好，报道如下。
一、材料
1、菌株来源
白色假丝酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48，热带假丝酵母菌ATCC750，克柔假丝酵母菌ATCC 6258，光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L，近平滑假丝酵母菌ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株，其中白色假丝酵母菌132株，热带假丝酵母菌10株，克柔假丝酵母菌2株，光滑假丝酵母菌2株，均经 API-20CAUX卡鉴定证实。
2、液体染色培养基主要试剂
葡萄糖、吐温- 80、尿素等。
3、正常人血清
医院检验科生化室提供。
二、鉴定方法
1、菌液准备
将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂，35℃培养48h，挑取菌落，混匀2ml无菌蒸馏水中，在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (约8×108／m1)。
2、液体染色培养基配制
选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖5g，蛋白胨10g ) 作基础， 在其中添加( NH4) 2 SO4 0．05g，KH2 PO 4 2 g，MgSO4 0．05g，CaCl2 0．05g。在上述培养基中添加刺激厚膜孢子形成的吐温- 80 2.0 g，玉米粉1．0 g，氯霉素0．05g，调p H为6．0～6. 8。高压灭菌后，加入经过滤除菌的1mo／L 尿素0．03 ml，贮存备用。接种待测菌并培养后，往菌液中滴加l0 g／L美蓝0．5 ml， 使生成的芽管和厚膜孢子着色，便于镜下观察。
3、液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验
在无菌试管中分别加入0．5ml液体培养基或人血清，每管加入相应菌液100，置35℃温育60、120、180min，分别用加样器取菌液 100至载玻片上，高倍镜下计数100个假丝酵母菌所产生的芽管数。
4、厚膜孢子检测
继续培养24～72h后，取菌液于载玻片上，加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。
三、结果
1、液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1。
表1 液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较
2、液体染色培养基测定芽管的特异性3h内，白色假丝酵母菌标准菌株( 4株) 和临床分离株( 1 3 2株) 均产生芽管，而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准菌株和临床分离株均不产生芽管。
3、白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。
四、讨论
本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成，适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养24～72h，还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管，因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比，在该培养基中芽管形成较快， 培养基成分为实验室常用的化学试剂，来源、配制均较方便，无病原体存在，比常用的人血清安全，适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好，高压除菌后可用半年。
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芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验，传统的芽管检测的试剂多为动物血清。我们研制了一种液体染色培养基，用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子，临床应用效果良好，报道如下。
一、材料
1、菌株来源
白色假丝酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48，热带假丝酵母菌ATCC750，克柔假丝酵母菌ATCC 6258，光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L，近平滑假丝酵母菌ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株，其中白色假丝酵母菌132株，热带假丝酵母菌10株，克柔假丝酵母菌2株，光滑假丝酵母菌2株，均经 API-20CAUX卡鉴定证实。
2、液体染色培养基主要试剂
葡萄糖、吐温- 80、尿素等。
3、正常人血清
医院检验科生化室提供。
二、鉴定方法
1、菌液准备
将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂，35℃培养48h，挑取菌落，混匀2ml无菌蒸馏水中，在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (约8×108／m1)。
2、液体染色培养基配制
选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖5g，蛋白胨10g ) 作基础， 在其中添加( NH4) 2 SO4 0．05g，KH2 PO 4 2 g，MgSO4 0．05g，CaCl2 0．05g。在上述培养基中添加刺激厚膜孢子形成的吐温- 80 2.0 g，玉米粉1．0 g，氯霉素0．05g，调p H为6．0～6. 8。高压灭菌后，加入经过滤除菌的1mo／L 尿素0．03 ml，贮存备用。接种待测菌并培养后，往菌液中滴加l0 g／L美蓝0．5 ml， 使生成的芽管和厚膜孢子着色，便于镜下观察。
3、液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验
在无菌试管中分别加入0．5ml液体培养基或人血清，每管加入相应菌液100，置35℃温育60、120、180min，分别用加样器取菌液 100至载玻片上，高倍镜下计数100个假丝酵母菌所产生的芽管数。
4、厚膜孢子检测
继续培养24～72h后，取菌液于载玻片上，加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。
三、结果
1、液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1。
表1 液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较
2、液体染色培养基测定芽管的特异性3h内，白色假丝酵母菌标准菌株( 4株) 和临床分离株( 1 3 2株) 均产生芽管，而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准菌株和临床分离株均不产生芽管。
3、白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。
四、讨论
本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成，适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养24～72h，还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管，因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比，在该培养基中芽管形成较快， 培养基成分为实验室常用的化学试剂，来源、配制均较方便，无病原体存在，比常用的人血清安全，适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好，高压除菌后可用半年。
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