Western Blot蛋白免疫

       蛋白质印迹（WesternﾠBlot）又称为免疫印迹（Immunoblot），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样本中的某种蛋白的分子生物学技术。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种免疫生化技术。由于WesternﾠBlot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western Blot常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行半定量分析。

实验步骤和结果分析
蛋白质抽提：
       实验对象对组织样品，取适量（约150ﾠmg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加0.3-0.4ﾠmL含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后冰上裂解，离心抽提总蛋白（或核蛋白）。
       实验对象为细胞样品，每份样品取1×10⁶-1×10⁷细胞，PBS清洗细胞以去除血清等培养添加物，去PBS加0.1-0.2 mL含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），冰上裂解，离心抽提总蛋白（或核蛋白）。
蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
SDS-PAGE：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，80v电泳浓缩胶，100 v电泳分离胶。
蛋白质转移到NC膜：组装滤纸凝胶纤维素膜夹层（黑胶白膜三明治模型），100v恒压条件下转膜，选定转膜时间（1KD/1 min）。
Western Blot膜的封闭和抗体孵育：
· 膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合；
· 封闭过的膜加入一抗（包括GAPDH或Actin内参抗体）室温孵育过夜，抗原抗体结合；
· PBST洗涤，二抗室温避光孵育；
· PBST洗涤；
· 加入显色液，采集数据。
提供实验报告：包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

实验流程

       上海生物芯片有限公司成立于2001年8月，公司由上海科技创业投资（集团）有限公司、上海张江（集团）有限公司、中科院上海有关院所、上海交通大学等在上海的国内知名大学、研究所、医院和企业共同组建而成，经国家发展与改革委员会批准公司建设和运行“生物芯片上海国家工程研究中心”，是我国生物医药领域规模最大的生物技术国家工程研究中心之一，是全国生物样本标准化技术委员会（TC559）、中国医药生物技术协会组织生物样本库分会（BBCMBA）与中国抗癌协会肿瘤样本整合研究分会的秘书处与主任委员单位。

       通过二十余年的建设和发展，公司（中心）确立了以生物样本库、基因芯片、高通量测序、蛋白芯片、组织芯片、数字化病理、分子病理与生物信息学为核心平台的技术创新服务体系，以分子医学检测技术和分子诊断产品研发生产为核心竞争力的产业化体系，形成科研和药物研发技术服务、分子诊断产品研发生产销售和分子医学检验三大主营业务，公司（中心）具备科研及公共技术平台服务优势、成熟的科技成果转化服务能力、国家工程研究中心品牌影响力等强大的自身资源及优势。