“Knock-out First”“一鼠多用”基因敲除服务

“Knock-out First”是一种设计巧妙的基因打靶策略，它只需要构建一种特殊的基因打靶小鼠，就可以通过和不同的工具鼠交配，获得完全基因敲除的小鼠、条件性基因敲除的小鼠、带Reporter基因的基因敲除小鼠等三种类型，满足多方面研究基因功能和特性的需要。

具体策略如下：

首先，采用CGES技术，将“FRT-SA-EGFP-LoxP-NEO-FRT-LoxP”元件，以及第3个 “LoxP”元件，分别插入到一个内含子与下游的内含子中去。当获得基因打靶成功的小鼠后，

（i）若直接与Cre小鼠交配，可以去除第1与第3个LoxP位点间的序列，从而获得Reporter小鼠（目标基因会同时失活），即目标基因在何种组织与细胞中表达，细胞就会被EGFP荧光蛋白所标记(也可以根据一个需要替换成其它颜色荧光蛋白)；

（ii）若直接与全身性的Flp小鼠（如Actin-Flp小鼠）交配，可以去除第1与第2个Frt位点间的序列（包含第1个LoxP位点），从而获得条件型Flox小鼠；

（iii）如果再将Flox小鼠与组织特异性的Cre小鼠交配，即可获得组织特异性的基因敲除小鼠。

（A-B）通过“Knockout First”策略制备的嵌合小鼠，其毛色为棕色（Agouti）与奶油色（Cream）相间，含有较少或不含有黑色毛色；（C-D）上述嵌合小鼠与C57/BL6小鼠交配后获得的F1代小鼠，其毛色为棕色（Agouti）,证明ES细胞已经整合入嵌合小鼠的生殖系，并且传递到F1代。

“Knock-out First” 服务流程和周期：（9-12个月）

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