【细胞实验】——细胞迁移、细胞侵袭、细胞流式检测等

1、细胞侵袭（点击可查看详情）

Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8μm，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。可通过这种模型来检测细胞的侵袭情况。

通过体外模型来检测细胞侵袭情况，主要应用于各种细胞因子对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响及一些抑制血管生成的新药研究。

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2、细胞粘附

细胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一类膜表面糖蛋白，它们以配体－受体特异性结合的方式介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的相互接触和结合并调节细胞功能，在胚胎发育和分化、正常组织结构的维持、炎症反应、免疫应答、凝血和血栓形成、创伤修复、肿瘤浸润与转移等许多生理和病理过程中发挥重要的生物学作用。

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3、细胞迁移

将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞迁移运动等的影响。

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4、流式细胞检测

流式细胞检测技术是利用流式细胞仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。

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5、流式细胞周期

PI ，即碘化丙锭，可以与细胞内DNA 和RNA 结合，采用RNA酶将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同，通常正常细胞的 G0/G1 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ，而G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ，而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

因此，通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为 G0/G1 期，S 期和G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率。

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6、流式细胞分选

流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术，它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选，对复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离，分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等。

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7 、流式细胞凋亡

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS） 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

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8、细胞增殖MTT

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高。

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9、透射电镜

利用电子射线（或称电子束）穿透样品，而后经多级电子放大后成像于荧光屏。透射率高，可以用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貌。能分辨0.1纳米以下的微细物质结构,放大倍数可达100万余倍。

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10、扫描电镜

在光学显微镜下小于0.2mm的一些细微结构，即便是再提高放大倍数也无法看清，这些结构称为亚显微结构或超微结构。

要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率。目前扫描电镜的分辨力为6~10nm，扫描电镜的最大有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。

样品制备简单，放大倍数大，分辨率高，场景深，图像立体感丰富，易于识别和解释，广泛应用于生物学和医学等领域。

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上海钰森生物技术有限公司成立10多年，专注科研服务，建立了自己的实验技术平台，能够提供动物造模、细胞培养、细胞实验（细胞染色、侵袭、趋化、转移、增殖、活性、凋亡等）、免疫印迹（WB）、PCR和Q-PCR、免疫组化（IHC-P/F）、免疫共沉淀(Co-IP)、质粒构建、病毒包装、RNA干扰……多项单项实验技术服务和课题总包服务，是国内自建较全面基础实验平台、最早从事生物技术服务为数不多的公司之一。

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公司在十多年的发展过程中，集聚了一批实验方面的资深顾问以及专业人士，能为您提供各种实验方面的一站式服务，包括实验设计、实验操作，数据分析以及处理等，也可承接不同阶段的相关实验。目前，公司承接的技术服务已涵盖了上海市及周边省市各级医院及研究院校的客户，并且得到了客户的一致认可和好评，实验数据和成果已在各类SCI杂志发表。

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