该技术克服了实时定量PCR检测基因表达工作量大、耗时久的缺点,将基因芯片的检测精度提高到了与实时定量PCR相当的水平。
qPCR Array技术服务主要实验步骤如下:
1 客户样品RNA抽提
a) 若实验对象为组织样品,取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml的RNA抽提试剂Trizol,匀浆后抽提RNA。
b) 若实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂Trizol,裂解后抽提RNA。
2 RNA质量检测
a) 紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,以计算其浓度并评估RNA纯度。
b) 使用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
3 cDNA模板制备
按照逆转录酶使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。
4 实时定量PCR
根据说明将cDNA模板适当稀释后加入到实时定量PCR反应混合液中,然后在含有基因特异性引物的96孔板各孔中加入等量反应液,进行实时定量PCR反应。
5 数据处理:利用仪器配套软件计算各张PCR芯片中的每个基因的Ct值。最后,采用△△Ct方法比较相应基因的表达量变化。
提供实验报告 :包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR芯片实验结果及相关图表。
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