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多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,体内标记技术,标记效率高达99%。
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技术简介
SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acidsin cell culture,SILAC),其基本原理是采用轻、重稳定同位素标记的赖氨酸/精氨酸进行细胞培养,细胞经传代培养6代后,细胞97%以上的蛋白质将被轻、重稳定同位素标记。等量混合标记稳定同位素标记的蛋白质,酶解后,进行质谱分析。SILAC标记技术是体内标记技术,且不影响细胞的功能,灵敏度高,广泛应用于比较蛋白质组学研究中。
技术优势
l 多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续试验对样品的影响是一致的,减少了试验操作和仪器设备引入的实验误差。
l 体内标记技术,标记效率高达99%。
l 定量线性范围广,尤其对相对差异较大的蛋白定量精确。
l 可以对多种在DMEM、DMEM-F12,1640三种培养基中培养的细胞进行标记。
l 该技术属于体内标记,其标记效率不受裂解液成分的影响,标记效果稳定。
实验流程
送样标准
l 细胞能够在补充透析胎牛血清的DMEM, DMEM/F12, 1640培养基中培养。
l 景杰负责细胞培养:
请将细胞培养瓶灌满培养基,在4度环境中运送。
培养过程中需要的特殊试剂由客户提供,或由我们代购。
l 客户负责细胞培养:
客户在标记6代后,需要提供少量细胞进行标记效率检测。达到97%以上方可放大培养。
客户需提供50ul以上细胞沉淀。
l 从培养基中收集细胞后,请用4度预冷PBS洗涤三次,细胞沉淀-80度保存,干冰运送。