转基因动物模型基因打靶技术服务

 

转基因动物的方法，主要有4类：①融合法，包括精子融合法，微细胞介导融合等。②化学法，包括DNA—磷酸钙沉淀法、DEAE—葡聚糖法、染色体介导法等。③物理法，包括显微注射法、电脉冲法、细胞冻存法等。④病毒感染法，包括重组DNA病毒感染、重组RNA病毒感染等。但真正成熟并可以稳定生产转基因动物的方法只有三种，即核显微注射DNA法、精子介导法和核移植法等基因转移方法。

 

体细胞核移植方法大体内容：体细胞核移植是近年来新出现的一种转基因技术。该方法是先把外源基因与供体细胞在培养基中培养，使外源基因整合到供体细胞上，然后将供体细胞细胞核移植到受体细胞——去核卵母细胞，构成重建胚，再把其移植到假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到转基因的克隆动物。

 

显微注射法大体的技术服务流程包括以下四部分：

 

1.打靶载体设计与构建：

项目起始后，根据客户项目的具体情况和要求，百恩维生物的技术专家将在一周内提供给客户打靶载体设计方案，包括示意图及具体的序列信息。经客户确认设计方案后，百恩维将开始构建打靶载体。

 

2.打靶成功的ES细胞筛选：

   打靶载体经测序验证正确后，需线性化打靶载体，然后通过电转化法导入ES细胞。通过载体上的正筛选和负筛选基因得到可能包含正确插入片段或替换片段的ES克隆。扩增这些ES克隆，提取基因组DNA。通过专门设计的引物用PCR方式鉴定ES克隆在基因组上的插入或置换位点是否正确。

 

3.由打靶ES细胞囊胚注射得到嵌合体动物：

扩增经鉴定插入或置换片段位置正确的打靶ES克隆，以囊胚显微注射的方式将一定数量的

4.打靶ES细胞注入动物囊胚中：

由嵌合体动物繁殖出生殖遗传系基因打靶动物将嵌合体动物与适当品系的动物交配，后代出生后，通过PCR方式检测动物是否含有打靶序列。如有，则该动物为具备生殖遗传能力的基因打靶动物。

 

 

  

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