一【检测步骤】
、测定前须知:
1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温(20~25℃)。
2. 使用之后立即将所有试剂及剩余的板条放置2~8℃。
3. ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA操作中的要点。
4. 在所有的恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
二、操作步骤:
1. 将所需试剂从微孔板中取出,放置室温(20~25℃)30min以上,液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板,将不用的微孔板与干燥剂一起重新真空密封,保存于2~8℃。不要冷冻。
3. 洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 加标准品/样本50ml到对应的微孔中,加入酶标物50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6. 小心揭开盖板膜,用洗涤工作液充分洗涤300ml/孔, 洗板5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干。
7. 加入显色液100ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应30min。
8. 加终止液50ml/孔,轻轻振荡混匀,设酶标仪于450nm处读每孔OD值。
【注意事项】
1. 室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为2M盐酸,避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件:
试剂盒保存于2~8℃,不要冷冻,将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象:
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8. 加入显色液后,一般显色时间为15~30min。若颜色较浅,可延长反应时间到35min(或更长),但不得超过40min。反之,则减短反应时间。
9. 该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
bio-equip.com
普瑞邦专注于食品检测产品的研制应用,拥有生物毒素标准物质研制、单(多)克隆&重组抗体制备、重组蛋白与表达技术、免疫快检技术开发和自动化仪器设备研制五个专业技术研发和应用平台,覆盖真菌毒素、蓝藻/海洋毒素、食品过敏原、转基因、酶法食品分析、违禁添加物等领域。尤其在生物毒素类标准品、稳定同位素内标(13C,15N)、免疫亲和柱、多功能净化柱、ELISA试剂盒/胶体金检测试纸及样品前处理仪器等产品在不同行业得到广泛应用和认可。
我们始终以持续创新的态度,致力于食品安全每一天!
电话:400-6885349
邮箱:info@pribolab.cn
网址:www.pribolab.cn