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Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)
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高效液相色谱法：
根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定
实验用前处理：
实验仪器和好耗材包括：
恒温水浴锅 溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机 定量滤纸 量筒 样品瓶 容量瓶 移液器或移液管
实验用试剂：色谱乙腈 色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等
HPLC条件：
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高效液相色谱仪
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色谱柱
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C18柱，150*4.6mm，5um
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流动相
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乙腈－水（25：75）
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荧光检测器：
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激发波长365nm，发射波长435nm；
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柱 温
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室温
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流速
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1.0ml/min
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进样量
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20ul
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出峰时间
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10分钟左右
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样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。
样品前处理：分不同样品
牛奶 水浴加热至40度，离心用上清液过柱净化；
乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；
发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，调节PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；
干酪：称取适量切细或粉碎，过筛用加纯水溶解，高速均质器匀浆，超声提取后收集上清液，然后用石油醚进行两次萃取，然后用适宜的有机溶液萃取，取若干上清液过柱净化
奶粉样品，用于蒸馏水溶解中，调节PH值至微碱性，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；
奶油：称取适量加甲醇水溶解，震荡后分页漏斗取下层溶液，蒸干后溶于水用于过柱净化。
免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。
┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。
注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。
HPLC 检测需要仪器与耗材
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产品名称
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说明
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规格
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黄曲霉毒素M1固体标准品
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参比对照使用
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100ug 1mg
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黄曲霉毒素M1液体标准品
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浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈
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1ml
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PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱
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用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素
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25/50T
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PriboFast泵流操作架（8位）
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用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速
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黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸
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用于去除HPLC检测时部分杂峰，有效提高灵敏度。110，1.5um
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100P
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不锈钢均质器
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高速匀浆样品，有效提高萃取效率
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旋转蒸发仪-超声波发生器
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酶联免疫检测法：符合国家标准
酶联免疫检测法采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素M1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。
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2.保修期：仪器验收合格双方签字之日起仪器质保壹年，终身维护。
3.安装与调试：公司派出专业工程师免费上门安装调试，免费为用户进行至少一次关于使用、维修、保养等方面的集中现场培训。
4.设备在安装调试中所需的附属材料等均由我公司免费提供。
5.仪器发生故障后与公司售后服务部联系，半个小时内给予答复或电话指导维修。
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