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测定抗原，也可测抗体。1.固相的抗原或抗体2酶标记的抗原或抗体3酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件即：夹心ELISA、间接ELISA、竞争ELISA。
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酶联免疫（ELISA）
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。即：夹心ELISA、间接ELISA、竞争ELISA。
夹心ELISA
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质。
加受检标本： 使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
间接ELISA
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。
操作步骤如下：
将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质
加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人lgG抗体。
加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体测各种与抗原相应的抗体。
竞争ELISA
竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤。
待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体之反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量，洗涤。
加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。
结果计算：
根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线（如图所示），按照检测样本的OD值在标准曲线上求出浓度值。
【ELISA标本收集】
◇液体类标本：
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
◇血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
◇细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
收费标准：
凡购买本公司目录任何一种检测试剂盒（酶联免疫、放射免疫），您只需将需要检测的样品和检测指标及标本数量（48T/96T）告知我公司业务人员即可，免收检测费用。在接到客户标本当日起，7个工作日内将检测报告送到客户手中。外地客户克邮寄样品，邮寄方式请电话垂询。
注意事项：
收集样品前都必须有一个完整的计划，必须确定被检样品的稳定性。我们建议对样品尽早进行检测，对取样后当天进行检测的样品请及时储存再4℃备用。对需要周期取样的样品，请将样品及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因低温和室温直接影响蛋白质的稳定性，从而直接导致实验结果，所以应尽量避免反复冻融。待测放免样品的客户在取样前须向我公司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我公司技术人员沟通。
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