鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

【产品名称】
通用名：鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】 鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起鸡的一种急性、高度接触传染性呼吸道传染病，本病呈世界性分布，是严重危害养禽业的最主要疫病之一。疫苗免疫是预防和控制鸡传染性支气管炎发生的最有效途径，而免疫后抗体水平的高低反映实际的疫苗免疫效果，直接关系到免疫鸡群对病毒的抵抗力。
    本试剂盒适用于：鸡血清抗体的检测，以确定被检鸡是否感染过鸡传染性支气管炎病毒或免疫鸡体内抗体水平；评估鸡群感染IBV的风险程度；了解雏鸡母源抗体水平，为IBV免疫程序的制定提供参考。

【原    理】
本试剂盒由预包被鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中鸡传染性支气管炎病毒抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有鸡传染性支气管炎病毒的抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有传染性支气管炎病毒抗体。
【试剂盒组成】

序号	名称	规格/96T×1	规格/96T×2	规格/96T×5
1	酶标记物	11ml×1(红盖)	11ml×2(红盖)	26ml×2(红盖)
2	样品稀释液	50ml×1(黄盖)	50ml×1(黄盖)	200ml×1(透明)
3	20X浓缩洗涤液	40ml×1(白盖)	40ml×1(白盖)	200ml×1(透明)
4	底物液A	6ml×1(白盖)	11ml×1(白盖)	26ml×1(白盖)
5	底物液B	6ml×1(黑盖)	11ml×1(棕盖)	26ml×1(黑盖)
6	终止液	6ml×1(黄盖)	11ml×1(黄盖)	26ml×1(黄盖)
7	阳性对照	1.0 ml×1(红盖)	1.5 ml×1(红盖)	2.0 ml×1(红盖)
8	阴性对照	1.0 ml×1(绿盖)	1.5 ml×1(绿盖)	2.0 ml×1(绿盖)
9	酶标板	96T×1	96T×2	96T×5
10	盖板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	说明书	1	1	1
13	稀释板	1	2	5

 
【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清先按10倍稀释（如在稀释板中加入90μl样品稀释液再加10μl血清，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入样品稀释液90μl，再加入稀释后的血清10μl。
注：样本稀释比例相当于1:100。
4.混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.2，阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】
1.C.O（临界值）=2.1× 阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.1时以0.1计算）。
2.未曾免疫鸡群：样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。
3.免疫鸡群：监测并记录样本当时的抗体水平，根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。

【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中鸡传染性支气管炎病毒IgG抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。