淀粉及其各组分检测试剂盒选型指南
浏览次数:580 发布日期:2024-12-10
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淀粉
检测试剂盒,用于研究淀粉及其作用的酶
淀粉是人类饮食中碳水化合物的主要来源。它在植物中以储存多糖的形式出现,在种子和块茎中的含量非常高。淀粉对食品工业的重要性不言而喻,但对造纸、纺织、生物塑料和石油工业也很重要。淀粉由两个组分亚群组成:
- 直链淀粉——由长的线性α-1,4-D-葡萄糖残基链组成(聚合度约300-3000);
- 支链淀粉——包含1,4-α-连接的D-葡萄糖残基线性链,通过1,6-α-分支点连接,这些分支点占总链接的3%到4.2%。动物组织中相应的储存多糖,即糖原,具有更高的分支度,1,6-分支点约占总链接的10%。
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图示:支链淀粉由线性的α-1,4-D-吡喃葡萄糖链组成,每24-30个残基就有α-1,6分支点。
抗性淀粉是指对人类小肠中存在的酶具有抗水解作用的任何淀粉。Englyst等人(Englyst, H. N. Kingman, S. M. & Cummings, J. H. (1992). 欧洲临床营养学杂志, 46 (补充2), S33-S50)定义了四种不同类型的抗性淀粉。
RS1:无法直接接触到的淀粉,例如种子或豆类以及未加工的全谷物中的淀粉。
RS2:以天然颗粒形式存在的抗性淀粉,如生土豆、青香蕉粉和高直链玉米淀粉。
RS3:当含淀粉食物烹饪并冷却时形成的抗性淀粉,例如在豆类、面包、玉米片以及煮熟并冷藏的土豆、意大利面沙拉或寿司米饭中。这种处理导致淀粉老化——冷却时直链淀粉和支链淀粉的再结晶——这使得淀粉对酶解作用具有抵抗力。
RS4:经过合成改性以抵抗消化的淀粉。这种类型的抗性淀粉可以展示出广泛的结构多样性。
食物中淀粉被人体消化系统中的酶降解的分析对于计算食物中的膳食纤维(未消化成分)和可用碳水化合物(已消化成分)非常重要。可以在我们的网站上找到。
试剂盒
淀粉及其组分
这些获得了AOAC批准的方法,通过酶法测定任何样品中的总淀粉(K-TSHK、K-TSTA、AOAC 996.11)和抗性淀粉(K-RSTAR、AOAC 2002.02)含量。改进抗性淀粉方法后使快速抗性淀粉程序(K-RAPRS)开发,该程序与最新膳食纤维方法(K-RINTDF,AOAC 2017.16)一致,采用4小时的酶孵育代替现有的16小时程序。这产生了更具生理相关性的结果,因为食物在小肠中的平均停留时间约为4小时。基于相同方法的新测定程序(K-DSTRS)允许测定快速消化淀粉(RDS)、慢速消化淀粉(SDS)、总可消化淀粉(TDS)和抗性淀粉。样品中的直链淀粉和支链淀粉含量也可以使用Megazyme的直链淀粉/支链淀粉(K-AMYL)试剂盒测定,该试剂盒基于刀豆蛋白A介导的沉淀步骤。所谓的“淀粉损伤”水平是另一个可以通过酶法分析的淀粉属性,使用淀粉损伤(K-SDAM)试剂盒。在此试剂盒中,高度纯化的真菌α-淀粉酶可以作用于破损的淀粉颗粒,但对未破损的颗粒几乎没有水解活性。膳食纤维(K-TDFR适用于AOAC 985.29、AOAC 991.43、AOAC 2001.03;K-INTDF适用于AOAC 2009.01、AOAC 2011.25和K-RINTDF适用于AOAC 2017.16)可以使用酶促-重量法测量。补充分析物,可利用碳水化合物,可以根据“Prosky型”孵育条件使用K-ACHDF或现代“McCleary”孵育条件(生理相关的4小时孵育)使用K-AVCHO测定。样品中的游离葡萄糖含量可以使用葡萄糖氧化酶或己糖激酶程序(K-GLUC和K-GLUHK)测定。
淀粉降解酶
已经将定义的比色寡糖配制成试剂盒,用于测量参与淀粉降解的主要酶,包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、淀粉葡萄糖苷酶和普鲁兰酶/极限糊精酶。在某些情况下,这些试剂盒中的试剂成分也可以单独提供。
碳水化合物
单糖
混合连接淀粉寡糖可从我们的产品中获得,用作色谱标准品以及用于酶表征和结合研究。
多糖
β-极限糊精可作为底物用于根据Farrand、AACC(SKB单位)或ASBC(糊精化单位,DU)碘基方法测量α-淀粉酶活性。
酶
α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)是一种内切酶,能够水解淀粉中的α-1,4葡萄糖连接。该产品一般分析和超纯形式的α-淀粉酶来源于细菌、真菌和猪。
β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)是一种外切酶,从α-1,4寡糖和非还原端的淀粉多糖片段中切割麦芽糖单元。
α-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.20)是一种外切酶,从α-1,4寡糖和多糖淀粉片段的非还原端切割葡萄糖单元。
淀粉葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.3)是另一种外切酶,作用于淀粉寡聚体和聚合物的非还原端,但它同时水解α-1,6连接和α-1,4连接。这是在食品工业中用于膳食纤维测定的关键酶。这种酶的商业制剂中经常存在污染物,这些污染物可能强烈影响测定结果。E-AMGDF具有商业上可获得的相当高的纯度。
极限糊精酶是一种内切酶,在自然界中含量较低,但对某些行业特别是酿酒行业至关重要。极限糊精酶水解淀粉中的α-1,6连接,但对底物结合有严格要求。例如,极限糊精酶对63-α-D-葡萄糖基-麦芽三糖没有活性,但容易水解63-α-D-麦芽三糖基-麦芽三糖。普鲁兰酶是极限糊精酶的微生物源等效酶。
图:淀粉降解酶水解作用的示意图。
酶底物
比色寡糖以试剂盒形式提供,用于测量α-淀粉酶(K-CERA和K-AMYLSD)、β-淀粉酶(K-BETA3)以及普鲁兰酶/极限糊精酶(K-PullG6)。比色寡糖(仅底物)在某些情况下可作为独立产品提供。比色寡糖(仅底物)在某些情况下可作为独立产品提供。
货号 |
品名 |
α-淀粉酶底物 |
O-BPNPC7 |
4,6-O-苯亚甲基-4-硝基苯基-α-D-麦芽庚糖苷(需要α-葡萄糖苷酶) |
α-葡萄糖苷酶底物 |
O-PNPAG |
4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷 |
不溶性和可溶性显色酶底物已分别从AZCL-淀粉和染色淀粉制备,用于检测和测量α-淀粉酶。极限糊精酶/普鲁兰酶的类似底物已从AZCL-普鲁兰和染色普鲁兰衍生而来。
可溶性显色底物在与所需的内切酶孵化后会产生比色反应,通过提供的标准曲线可以将其与酶活性相关联。
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不溶性显色底物推荐用于琼脂/凝胶上的定性筛查实验,但这些底物也有片剂形式,可以在定量分析中使用(同样通过将测量的吸光度与提供的标准曲线相关联),具有改进的便利性,因此分析员的生产率更高。