如何通过激光显微切割改善 DNA 突变分析工作流程
癌症研究：提取未稀释的癌组织进行DNA突变分析
DNA 突变导致异常蛋白质或缺失功能蛋白质，这可能导致细胞不受控制地增殖并变得癌变。为了找到并理解特定癌症类型的潜在突变，提取纯肿瘤材料是极其重要的。这尤其具有挑战性，特别是当只有有限数量的癌性组织可用时（例如小转移）。激光显微切割允许提取纯粹的癌性组织，而不会用健康细胞污染您的样本。DNA 测序将导致有效且可重复的结果，帮助轻松识别致癌的 DNA 突变，因为不会被污染的健康细胞掩盖。
精确到单细胞的 DNA 变异分析工作流程
徕卡的激光显微切割系统将通过精确切割您感兴趣的细胞来改善您的工作流程。每一步都在视觉控制下进行，并且不会与周围组织污染。
DNA 分析工作流程 - 步骤
01.样品准备
通常，激光显微切割使用特殊的基于膜的载玻片。LMD的样本准备是简单的，可以从经典的组织学准备中得出。
石蜡包埋将组织样本带入可以切成薄片的状态。或者，您可以利用冷冻切片来准备您的载玻片。如果有新鲜的癌组织可用，您应该优先选择冷冻切片以保护核酸不被降解。
我们将为您的应用提供合适的LMD载玻片。
02.固定和染色
一般来说，可以使用石蜡切片或冷冻切片。这里我们将概述冷冻切片的使用。
样本切片应在冷冻切片后立即用丙酮、乙醇或乙醇和醋酸的混合物固定和染色。
H&E 是一种常见的组织学染色，其中苏木精染色细胞核，伊红染色细胞质。
H&E 染色适用于石蜡切片和冷冻切片。
03.可视化和 ROI 定义
徕卡 LMD激光显微切割系统可以生成自动样本概览，便于轻松导航到您的感兴趣区域 (ROI)。
您的 ROI 可以通过 AVC 软件模块自动识别和标记，或者您可以手动应用形状。
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激光显微切割文章与教程
04.激光显微切割
接下来，定义的感兴趣区域（ROIs）在视觉控制下被激光精确切割，并通过重力直接收集。视觉控制的切除可以防止肿瘤材料与健康细胞混合，从而扭曲结果。通过重力收集允许使用标准、经济实惠的 耗材，如 PCR 管或 8 条管。
此外，您可以使用“移动和切割”工具直接在飞行中切割样本，而无需任何预定义形状。
我们提供适合您符合需求的LMD激光显微切割系统。
05.DNA提取
徕卡显微系统推荐使用高质量的 QIAGEN 试剂盒（QIAamp® DNA Micro Kit）用于核酸的制备。
它们可以立即用于下游应用，如 PCR、测序、定量实时 PCR，或者可以在-20°C 下存储，直到需要时使用。
06.DNA突变分析
DNA 突变分析是通过下一代测序（NGS）进行的。
其他技术如焦磷酸测序或经典的 DNA 桑格测序也适用。
典型的研究领域
- Pathology research 病理研究
- Neuroscience 神经科学
- Pharmaceutical research 制药研究
- Plant research 植物研究
- Epigenetics research 表观遗传学研究
典型的研究领域
- LMD 传单 – DNA 突变分析
- LMD 应用视频
参考文献：
1.Shen et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0703-0
2.Makohon-Moore et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0481-8
3.Untch et al., CancerRes, 2018, doi: 10.1158/0008-5472.CAN-17-1925
4.Huang et al. Nanotheranostics (2018)
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