利用PIPETTY电动移液器进行CCK-8实验

一、实验准备
1、PIPETTY MSIC01-02-1000电动移液器一把
2、配套吸头FDT-1000A-1-TLSF
3、试剂：CCK8检测试剂盒、DMEM或其他培养基、双抗、FBS、PBS、DMSO
4、细胞计数板
5、5ML离心管
6、96孔板
7、记号笔1只

• 实验原理

CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8[化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
 
                   CKK-8检测原理

• 操作步骤

1、先在盖子上标记好信息
 
2、孔板最外圈加PBS
 
3、先用细胞计数器计数细胞悬液中的细胞数量，最好不要超过10^8/ML，然后将PIPETTY移液枪调到混匀模式，吹匀细胞悬液（如果用普通移液枪的话，细胞一定要吹打均匀，呈单细胞！）
 
4、将移液枪调到100μL的分液模式开始铺细胞，为了避免细胞分布不均匀，先用移液枪将吹打均匀的细胞吸起来，让后将枪头紧贴着孔的一侧壁(注意枪头的尖不要接触孔底)，然后将枪头中的细胞缓缓的打下去，种好之后千万不要摇晃板子。
 
 
5、第一个细胞铺完啦，现在重复以上步骤开始铺第二个细胞，(这里有个小TIPS，如果用普通移液枪需要铺10个孔混匀一次细胞液，避免细胞沉降带来误差，但是PIPETTY移液枪非常便捷，一步到位，吹打一次就OK啦）
 
补充：从6孔板到96空板要细胞分散均匀，先用培养基把细胞稀释好，再把培养板放在适当的位置，加入细胞时和加入细胞后不移动培养板;如果空中有的地方没有培养基可吹打，但不要移动培养板，加入细胞后静置20-30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然，前提是细胞消化的很好。