激光共聚焦荧光芯片扫描仪助力能量代谢研究

 

• 研究目的：内源性肾上腺皮质肽刺鼠关联蛋白（AgRP）在觅食行为研究十分广泛，但其对能量代谢的调节尚不清楚。
• 作者单位：美国-斯克利普斯研究所
• 期刊：iScience
• 发表年份：2019年
• 样本：合成的多肽
• 芯片类型：聚糖芯片
• 芯片扫描仪：Innopsys公司的激光共聚焦荧光芯片扫描仪

实验方法：

第一步：进行AgRP相关的多肽合成和纯化。

第二步：氨基(-NH2)修饰的的硫酸肝素聚糖化合物点印在NHS包被的玻片上，AgRP（WT）和两种AgRP电荷变体肽（4Q；4K）在TMS缓冲液中稀释至50 mg/mL，与玻片进行孵育，随后加入络合的Rb抗人AgRP 抗体(10 mg/mL，一抗)和抗Rb IgG-Alexa 488 (5 mg/mL，荧光二抗)，最后使用法国Innopsys公司的生物芯片扫描仪进行荧光信号检测和定量分析。

结果显示：AgRP和电荷修饰AgRP变体与硫酸肝素聚糖阵列相结合；AgRP的结合亲和力与巯基化状态和硫酸肝素寡糖的长度有关，6S和NS磺化对AgRP的结合有利，而3S磺化对AgRP的结合不利，AgRP-4K突变型的结合能力是野生型的50倍，如下图。 第三步：自由摄食量与对食物的操作性反应监测。

结果显示：AgRP-4K突变型小鼠对食物的摄取量和体重都有明显增加，如下图（A、E每日基本进食量；B、F未突变野生型；C、G、D、H突变型）。 第四步：实验动物综合监测，（气体浓度--氧气、二氧化碳测量、血流，体温，活动，进食，饮水等），结果如下图。 结论：

• 1.AgRP可增加小鼠的自由摄食和对食物的操作性反应，降低氧气消耗，降低体温及活动，本体能量消耗较低。
• 2.AgRP可增加呼吸交换率，减少脂肪氧化和碳水化合物转移
• 3.AgRP作用的持续时间和强度取决于其带正电的氨基酸密度，表明代谢作用取决于其对硫酸肝素的亲和力。

综上：通过验证AgRP与硫酸肝素之间的相互作用，表明其参与到中枢能量调节和脂肪代谢过程当中，这对临床研究代谢性疾病具有重要意义。 原文：Chen et al.iScience 22, 557– 570 December 20, 2019 . https://doi.org/10.1016/ j.isci.2019.10.061 Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。Innoscan系列扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅有效降低了荧光光漂白现象以及信号损失，还可以有效缩短扫描时间。在基因组和蛋白组表达，基因突变，SNP检测，CGH，细菌病毒检测，肿瘤特异性标志筛查，病理组织筛查等方面都有非常广泛的应用。 

环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Innoscan大中华区代理商，负责Innoscan产品大中华区的营销和售后支持。

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