细胞库、菌株库、质粒库的自动化灌装解决方案

任何一个抗体药物的开发和生产都是从细胞株开始的，细胞建库是细胞株管理的关键一环，其应在符合中国现行《药品生产质量管理规范》的条件下制备。目前，世界上较权威的细胞库机构或者研究院都采用三级细胞库管理模式，即：原始细胞库(PCB)，主细胞库(MCB)，工作细胞库(WCB)。在某些特殊情况下，也可采用细胞种子和主细胞库二级管理，但需要得到国务院药品监督部门的批准。三级细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞，灌装设备AbioFill V100可通过自动化操作，轻松实现大批量细胞灌装。

　　上期给大家分享了AbioFill V100可完美用于MSC细胞的自动化灌装【细胞灌装】AbioFill V100助力MSC细胞自动化灌装，今天给大家从用户角度分享AbioFill V100如何自动化灌装CHO细胞，助力细胞株建库，并多维度评估设备灌装CHO细胞后的体积、密度、活率等参数与手动灌装相比的优势。
 

  CHO细胞灌装实验内容  
 

　　  01  　实验材料：

　　细胞：CHO细胞

　　冻存液：培养基+DMSO

　　冻存管：Corning 430659(2ml,Ex)

　　程序冻存盒等

　　  02  　仪器设备：

　　灌装系统：AbioFill V100细胞灌装系统

　　  03  　实验过程

　　(1)参数设置

　　灌注模式：开盖-灌注-封盖

　　灌注流速：350μL/s

　　灌注体积：1000μL

　　(2)安装一次性灌装管

　　采用CPC快接头将一次性灌装管与装有样品的摇瓶进行对接，避免操作过程中细胞样品被污染。

 

 

　　(3)冻存管编号并安装

　　为后续分析所取样品具有代表性，对冻存管进行编号，共灌注120支，选取每板A1、D6孔进行测试。

　　  04  　结果分析

　　本实验采用手动灌装细胞为对照，在灌注前对细胞样品进行计数，了解其活率密度，在灌注结束后每板选取A1、D6孔(共10支样品)进行活率、密度以及体积测试。活率及密度测试为了评估设备对细胞样品是否存在损伤，而体积测试是为了评估设备的灌注精准度。灌注后的样品按照常规方式进行冻存，一周后，将样品进行复苏，复苏后进行活率密度计数(数据未展示)，并在复苏后第三天再进行活率密度测试并计算倍增时间(DT)，评估设备是否影响细胞的生长状态。

手动与设备法灌注前后及复苏D3细胞密度、活率、体积与DT对比表

手动与设备法灌注前后及复苏D3细胞密度与活率对比图

　　从结果可以看出灌注前后：AUTO(设备灌装)和Manual(手动灌装)组内无差异，组间相比AUTO组细胞密度、灌装体积的CV值比Manual组低；两组细胞活率CV值差异较小。在复苏D3：AUTO和Manual组间相比，AUTO组密度的CV值比Manual组低10.9%；活率CV值比Manual组低4.5%；从DT上看AUTO组和Manual组无明显差异，证实灌装过程对细胞无损伤，不会改变细胞增殖规律，灌装过程均无染菌、总体上结果表现良好。本次测试表明灌注前后、冻存复苏后AUTO表现均优于手动组。
 

　　当然，AbioFill V100除了可进行高产、稳定的三级细胞株建库的灌装，还能应用于以下场景：

　　   三级菌株库与cGMP级别的质粒库/病毒载体库的灌装

　　质粒是细胞、基因和疫苗治疗的重要工具，建立稳定的三级菌株库对于质粒的生产至关重要。在基因与细胞治疗领域，目前大都采用瞬转技术，需要大量的GMP级别的质粒；在治疗性药物、疫苗等研究中，质粒可以作为终产品注入人体内，进行目标基因的表达。AbioFill V100可以实现三级菌株库和质粒库高效的无菌灌装。

　　   生物制剂的冻存管灌装，如细胞因子、病毒液等

　　生物制剂因具有生物活性所以在保存中有严格的温度要求，因此灌装环节尤为重要。制剂通常采用体积较小、与使用剂量匹配的冻存容器，如不同规格的冻存管等。