多肽序列测定的技术与应用

多肽序列测定是确定多肽或蛋白质中氨基酸的确切排列顺序的过程。这个过程对于蛋白质功能研究、疾病机制分析、药物设计等领域都至关重要。

一、多肽序列测定技术

 

1.Edman 降解法：

 

通过逐步去除多肽N端的氨基酸并测量释放的每一个氨基酸来确定序列，一次测定一个氨基酸，适用于短的多肽序列。

图1

2.质谱测序：

 

肽质谱测序：通过生成多肽的碎片并测量它们的质量来确定氨基酸的序列。
肽图分析：消化蛋白质产生肽段，然后通过测量肽段的质量并与数据库比对来识别蛋白质。
MS/MS或串联质谱：一种用于获得多肽内部碎片的质量信息的技术，从而推断氨基酸序列。

图2

3.DNA 序列推导：

 

通过测定编码目标蛋白质的基因的DNA序列，然后通过转录和翻译的信息来推导蛋白质的氨基酸序列。

二、多肽测序应用：

 

1. 蛋白质鉴定和特性研究

 

通过多肽序列的确定，研究蛋白质的生物功能、结构和亚型。

2. 抗原多肽设计

 

利用多肽序列信息，可以设计合成多肽作为实验研究的抗原，用于抗体的生产。

3. 蛋白质工程和药物设计

 

确定并修改蛋白质或酶的活性位点，优化其功能或特性。

4. 疾病研究和生物标记物的鉴定

 

分析疾病相关蛋白的多肽序列，用于疾病机制的研究和生物标记物的鉴定。

5. 表达产物验证

 

在基因克隆、表达蛋白质生产过程中，用于验证目标蛋白质的序列和正确表达。

6. 研究蛋白质间的相互作用

 

分析蛋白质亚单元之间的交互，探讨蛋白质复合物的组装机制。