大鼠ELISA实验间接法实验步骤
ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体（capture Ab）固定在固相载体上，再加入一级检测抗体（primarydetection Ab），形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶（enzyme）标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质（substrate），作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。
大鼠ELISA实验间接法实验步骤：
1、抗原包被过夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。
抗原用量：0.1μg*100N/抗原浓度 （N为板数）
2、封闭：弃上清 加300μL/孔封闭液，37℃放置2h。
3、洗涤：用洗涤液洗3次
4、加一抗(待测样品为细胞培养上清)：将含单克降抗体的细胞培养上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培养基作为阴性对照，已知样品血清（1：200稀释于1%BSA+PBST中）作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。
测免疫效价待测样品为小鼠血清时：采小鼠血液于常温20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min离心。将含抗体的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST连续倍比稀释(按照1：200开始)，100μL /孔。每个样品平行做两份，小鼠阴性血清或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。
5、洗涤：用洗涤液洗5次。
6、加二抗（酶标抗抗体）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀释，100μL／孔， 37℃恒温箱温育1h。
7、洗涤：用洗涤液洗5次，
8、显色：加新鲜配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒温箱放置10min，显示蓝色。
9、终止反应、比色：加30μL/孔H2SO4终止液．颜色变黄；用酶标仪测定450nm 630nm处各孔的吸光值，阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。
大鼠ELISA实验间接法实验步骤：
1、抗原包被过夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。
抗原用量：0.1μg*100N/抗原浓度 （N为板数）
2、封闭：弃上清 加300μL/孔封闭液，37℃放置2h。
3、洗涤：用洗涤液洗3次
4、加一抗(待测样品为细胞培养上清)：将含单克降抗体的细胞培养上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培养基作为阴性对照，已知样品血清（1：200稀释于1%BSA+PBST中）作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。
测免疫效价待测样品为小鼠血清时：采小鼠血液于常温20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min离心。将含抗体的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST连续倍比稀释(按照1：200开始)，100μL /孔。每个样品平行做两份，小鼠阴性血清或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。
5、洗涤：用洗涤液洗5次。
6、加二抗（酶标抗抗体）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀释，100μL／孔， 37℃恒温箱温育1h。
7、洗涤：用洗涤液洗5次，
8、显色：加新鲜配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒温箱放置10min，显示蓝色。
9、终止反应、比色：加30μL/孔H2SO4终止液．颜色变黄；用酶标仪测定450nm 630nm处各孔的吸光值，阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。
