纳米抗体的制备

1. 纳米抗体的概念：

纳米抗体，又称为驼类单域抗体。是存在于驼类和软骨鱼类中天然存在的仅由两条重链组成的特殊抗体上的重链可变区（VHH, Variable domain of heavy chain antibody）。纳米抗体晶体直径为2.5nm，长约4nm，分子量仅为传统的完整抗体的1/10（约15kD）但依然具有完整的抗原识别能力，并且可以单独稳定的在体外存在。

泰克生物建立了一个完善的，成熟的噬菌体抗体展示技术平台，提供多种抗体文库的构建服务（人源scFV抗体文库构建服务、人源Fab抗体文库构建服务、羊驼VHH抗体文库构建服务、人源抗体噬菌体文库制备服务、骆驼免疫VHH抗体库构建服务）和预制肽文库/抗体库筛选服务。其中，泰克生物从事羊驼VHH抗体制备已有9年多的时间，每年大约完成数百个羊驼VHH抗体构建服务。

2. 相比于常规抗体，纳米抗体的优势有：

（1）分子量小，易于渗透进致密组织甚至是血脑屏障；

（2）亲和力高、特异性强、溶解性及稳定性好；

（3）人体的免疫原性弱，生物相容性好；

（4）原核或真核系统中高表达，易于生产；

（5）Nb结构简单，易于工程化改造。

3. 纳米抗体的制备：

图1：纳米抗体的制备流程图

主要流程：羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。

1、羊驼经过抗原免疫后体内产生成熟抗体。

2、采取免疫或未免疫的羊驼外周血液、分离羊驼外周血B淋巴细胞。

3、提取总RNA，反转录成cDNA，以cDNA为底物采用巢氏PCR扩增出纳米基因的基因片段。

4、然后将扩增出的纳米抗体的基因片段通过限制性内切酶作用连接到噬菌体载体上。

5、将连接产物电转化至感受态TGl中，构建出天然或免疫的羊驼源噬菌体展示纳米抗体文库。

6、通过抗原孵育和ELISA鉴定筛选出所需纳米抗体,然后对其进行测序。

7、纳米抗体表达纯化，纳米抗体可在大肠杆菌，酵母或哺乳动物细胞系里进行表达，因其仅含100多个氨基酸残基，为验证其是否与抗原结合，可构建质粒在大肠杆菌中或酵母菌株中进行快速表达及纯化，或者同时在两种菌株中进行表达纯化，验证表达结果。

8、大规模表达及纯化，纳米抗体可由大肠杆菌或酵母中进行诱导表达并在发酵罐中大规模表达，其产量均在g/L以上，故可进行量产应用于试剂盒检测，甚至临床药物规模化量产。