脑缺血再灌注模型实验介绍（MCAO模型）

缺血性脑血管病(ICVD)是威胁人类健康与生存的主要疾病之一，是中老年人的常见病，具有发病率、死亡率、致残率、复发率高的特点，是目前重点防治的一种疾病。目前科研工作者通过在动物上复刻这种疾病，方便研究药物的治疗效果或者发病机制更方便。目前常见的大鼠模型是脑缺血再灌注（MCAO）模型，下面对这个模型的建立以及后续的机制研究方案做一些介绍，供各位科研工作者参考。
 
1.实验动物：取适应性饲养一周的健康SD大鼠，雌雄均可
2.术前器械及物品准备（所有物品消毒备用）
1）干棉球，酒精棉球
2) 碘伏＋棉签
3）小动物麻醉机
4) 常规手术器械
5) 显微手术器械
6）缝合包
7）小动物呼吸机
8）6-0带线缝合针
3.麻醉：麻醉前将呼吸机进气口连接麻醉机出气口。大鼠在小动物麻醉机箱体内预麻醉；
4.预麻醉后将大鼠以仰卧位固定在解剖板上，戴好麻醉机面罩，颈中部备皮，消毒；
5.沿颈部正中切开皮肤，钝性分离皮下组织，在分离过程中会看到颌下腺，将腺体轻轻推到一侧，分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可用拉钩将皮肤肌肉固定好。此时可见到颈总动脉，小心向头侧跟心侧剥离劲动脉跟其随行的神经，注意动作要轻，不要损伤神经；
6.剥离到头侧约0.5cm时可以看到颈总动脉分成颈内动脉跟颈外动脉，继续剥离2根血管跟神经，此时用预先准备好的血管夹夹闭颈总动脉（尽量靠心端），准备好的一根丝线结扎死颈外动脉（尽量远离分叉处），另外一根套在颈外动脉（接近分叉处）打活结备用。用血管夹夹闭颈内动脉；
7.将大鼠手术部位移至体视镜下，用显微剪在颈外动脉上斜行剪一个小口，用显微镊夹起MCAO线拴从血管上的小口穿入血管，穿到分叉处时轻轻提起结扎颈外动脉的丝线，待线拴进入颈内动脉，稍微拉紧之前打活结的丝线，松开血管夹，继续向里面推送线拴，插入至颅内微感阻力时拉紧活结；
8.缺血90分钟后，拔出线栓，把活结扎死。缝合肌肉跟皮肤。并进行尾静脉注射，24h后取材。
 
目前实验室较多采用MCA阻断0min、90min和120min的短暂脑缺血-再灌注模型，研究多种药物对MCAO的治疗效果和分子机制，取材后检测TTC判断造模情况以及大鼠神经功能评分；
 
常规研究MCAO模型的动物分组方法如下：

1. 假手术组
2. MCAO模型组
3. MCAO模型组+给药组
4. MCAO模型组+SIRNA组（腺相关病毒注射）

 
一般给药方式可以为：灌胃、尾静脉注射、腹腔注射等；可以根据试剂的情况调整给药频次和方式；甚至也可以先给药几天以后再造模也可以；
另外一种腺相关病毒注射：目的是为了在动物体内让某种蛋白表达量上升或者下降，用于研究相关分子机制的；
 
模型结束后取样检测，进行药物治疗效果评估以及可能相关的分子机制。

1. TTC检测；
2. QPCR检测；
3. WB检测；
4. 神经功能评分；
5. 行为学检测：比如平行木实验、爬绳实验等；
6. 组学检测