细胞培养小分子药物配制方法解析

科研实验中我们经常需要配制各种浓度的试剂。例如细胞实验一般需要加入小分子激动剂/抑制剂；分子转化实验一般会加入抗生素；免疫实验需要加入免疫刺激物/免疫佐剂等。这些昂贵的试剂浓度一旦计算错误，不仅挑灯夜战得来的数据毁于一旦，早日发文的愿望也随之破灭，可谓一失足成千古恨。今天小爱就为大家解决这一难题，让我们学会快速换算试剂浓度，摆脱科研失误。
 

案例一    抑制剂储存液配制

我们买来的小分子抑制剂一般是冻干粉，需要把它配制成溶液。首先，我们应该知道药物的分子量、溶解度以及规格。如果是毫克级小包装，一般不需要称量分装，直接在原瓶中溶解配成储存液。
 

以ROCK抑制剂Y-27632为例, 该药物推荐溶剂DMSO，同时，最大只能配成129.38mM的储存液。这一点非常重要。有些人没有注意药物溶解性，直接在非水溶性药物中加入PBS配置，结果药物不溶，“损失惨重”。

假如我们需要配置10mM储存液，计算公式如下：
 

   质量（mg）= 浓度（mM）x 体积（L）x 分子量  （1）
5（mg）= 10（mM）x ?（L）x 247.34

即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO，即可配制成10mM溶液。（注：此处要预估原瓶的容量，如果原瓶容量小于2 mL，应考虑配置更大浓度的储存液，如20mM，加入1.01 mL DMSO）。
 

此外，我们也会经常遇到质量浓度和摩尔浓度单位转换，同样以10mM Y-27632为例：

10mM=10mmol/L，化合物分子量为247.34，即247.34g/mol=247.34mg/mmol
10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL
即10mM Y-27632溶液相当于2.4734mg/mL

浓度快速换算法则：
1）mM转换mg/mL，摩尔浓度数值乘以分子量再除以1000；
2）mg/mL转换mM，质量浓度数值除以分子量再乘以1000。
 

案例二     抑制剂储存液稀释

我们买来抑制剂的冻干粉，配制储存液的浓度为10mM，如果需要使用终浓度为25uM进行细胞实验，需要加入多少抑制剂储存液呢？记住下面这个稀释公式就可以了：
 

起始浓度 x 起始体积 = 最终浓度 x 最终体积
   C1（mM） x V1（mL）= C2（mM）x V2（mL） （2）
首先，注意单位，我们假设最终体积为2mL，代入公式：
10（mM）x V1（mL）= 0.025（mM）x 2（mL）
即我们需要吸取5uL的储存液进行实验操作。
 

案例三    百分比浓度换算

我们在使用二硫苏糖醇(DTT)做实验时，会遇到这样的问题：已发表的文献中使用0.1%的DTT溶液，而你购买的DTT为1mol/L的储存液，那么这该如何换算呢？请听小爱为您解答：
 

DTT的分子量为154，即154g/mol，储存液换算成质量浓度C1为
154g/mol x 1mol/L = 154g/L

假设需配制1L的0.1%DTT溶液，即V2 = 1L = 1000mL
0.1% DTT溶液为0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L，即C2 = 1g/L

再使用公式（2）C1 x V1 = C2 x V2 可得：
154（g/L）x V1（L）= 1（g/L）x 1（L）

V1 = 6.5mL，即吸取6.5mL 1mol/L的DTT储存液，加入993.5mL稀释液中即可获得0.1%的DTT溶液。
 

如果我们购买的是固体二硫苏糖醇，配制0.1%的DTT溶液方法如下：精确称取1g二硫苏糖醇，用水定容至1000mL即可。

DL-二硫苏糖醇科普

DL-二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)具有很强的还原性，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。DTT有抗氧化作用，它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。DTT中还含有一定RNA酶抑制剂，具有抑制RNA酶活性的作用。具有巯基乙醇相似的作用，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。用作蛋白质巯基保护剂和蛋白质二硫键的裂解和顺序分析。

DL-二硫苏糖醇应用：

※ 作为牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的还原和烷基化反应物之一；

※ 作为精子去膜和再激活培养基的一个组分；

※ 因硫醇可有效保护生物催化剂的活性位点而维持酶的稳定性；

※ 作为还原剂用于测试N-乙基马来酰亚胺与巯基反应的特异性。