超高纯度ATP制备下游工艺解决方案
ATP简介及市场背景
三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)是一种核酸，作为细胞内能量传递的“分子通货”，储存和传递化学能。ATP在核酸合成中也具有重要作用。ATP 是三磷酸腺苷的英文名称缩写。ATP分子的结构式可以简写成A-P~P~P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基团，~代表一种特殊的化学键，叫做高能磷酸键，高能磷酸键断裂时，大量的能量会释放出来。ATP可以水解，这实际上是指 ATP分子中高能磷酸键的水解。高能磷酸键水解时释放的能量多达 30.54kJ/mol，所以说 ATP 是细胞内一种高能磷酸化合物。
ATP作为核苷类衍生物在体内参与磷脂类(卵磷脂，脑磷脂，丝氨酸磷脂、鞘磷脂等)的生物合成。在医药和精细化工行业中有着广泛的用途，尤其在医药领域的应用，有着不可替代的功能。国内目前能进行三磷酸腺苷生产的公司较少，且产品纯度不高，产量较低，规模效益很差，一些企业被迫停产。国内生产的三磷酸腺苷无法满足制药等行业的需求，每年都要花费大量外汇进口三磷酸腺苷。
ATP的合成
三磷酸腺苷(ATP)是以次黄嘌呤核苷酸为底物，经生物发酵的技术制得的高能化合物，三磷酸腺苷是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，被誉为细胞内能量的“分子货币”，储存和传递化学能，蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成都需它参与，可促使机体各种细胞的修复和再生，增强细胞代谢活性，对治疗各种疾病均有较强的针对性。
随着酶工程、生化技术的发展，以三磷酸腺苷（ATP）为原料，采用酶促法生产医药产品，已达到产业化应用规模，ATP市场需求日益增加。目前国内市场ATP供应，基本上采用以腺苷为原料合成ATP的工艺生产。
高纯度ATP的规模化生产及下游工艺解决方案
我们从大规模工业化生产三磷酸腺苷(ATP)的角度出发，利用成本低廉的发酵-层析分离的方法生产。由于三种磷酸腺苷的理化性质很相近，而且三磷酸腺苷酶转化液中各种杂质含量较多，导致下游分离纯化很困难。目前国内在分离方面存在的缺点是：所用树脂的分离度低；树脂利用率低；所得产品色素含量高；产品的收率和纯度较低等。
针对以上问题，我们提出了如下的分离策略：首先，由于三磷酸腺苷酶转化液中蛋白含量高，杂质种类多等特点，提出了用盐酸沉淀蛋白、离心、超滤等方法对KFP酶转化液进行预处理，得澄清液，达到了上柱要求。虽然ATP酶转化液中杂质含量很高、种类多，但是为简化工艺，缩短生产周期，蓝晓科技尝试只通过一种层析填料对ATP进行分离，等度洗脱即可达到99%纯度，收率也可以达到90+%。（此款层析介质同样适用于NTP及类似物。）
蓝晓科技大规模制备超高纯度ATP工艺案例
蓝晓科技大规模纯化超高纯度ATP用填料（具体型号请联系蓝晓科技电话：0512-65160522）与传统层析填料相比，显著提高了下游纯化工艺的生产效率和样品回收率，广泛应用于抗体、蛋白质、多肽、核酸等生物分子的捕获、中度纯化、精细纯化。
中试应用案例：
（1）层析填料：具体型号联系蓝晓科技电话：0512-65160522
（2）样品：5mg/ml浓度 ATP粗品
（3）波长：259nm
（4）柱体积：980.86ml
（5）流速：120cm/h；
图1：三磷酸腺苷(ATP)
三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)是一种核酸，作为细胞内能量传递的“分子通货”，储存和传递化学能。ATP在核酸合成中也具有重要作用。ATP 是三磷酸腺苷的英文名称缩写。ATP分子的结构式可以简写成A-P~P~P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基团，~代表一种特殊的化学键，叫做高能磷酸键，高能磷酸键断裂时，大量的能量会释放出来。ATP可以水解，这实际上是指 ATP分子中高能磷酸键的水解。高能磷酸键水解时释放的能量多达 30.54kJ/mol，所以说 ATP 是细胞内一种高能磷酸化合物。
ATP作为核苷类衍生物在体内参与磷脂类(卵磷脂，脑磷脂，丝氨酸磷脂、鞘磷脂等)的生物合成。在医药和精细化工行业中有着广泛的用途，尤其在医药领域的应用，有着不可替代的功能。国内目前能进行三磷酸腺苷生产的公司较少，且产品纯度不高，产量较低，规模效益很差，一些企业被迫停产。国内生产的三磷酸腺苷无法满足制药等行业的需求，每年都要花费大量外汇进口三磷酸腺苷。
ATP的合成
三磷酸腺苷(ATP)是以次黄嘌呤核苷酸为底物，经生物发酵的技术制得的高能化合物，三磷酸腺苷是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，被誉为细胞内能量的“分子货币”，储存和传递化学能，蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成都需它参与，可促使机体各种细胞的修复和再生，增强细胞代谢活性，对治疗各种疾病均有较强的针对性。
随着酶工程、生化技术的发展，以三磷酸腺苷（ATP）为原料，采用酶促法生产医药产品，已达到产业化应用规模，ATP市场需求日益增加。目前国内市场ATP供应，基本上采用以腺苷为原料合成ATP的工艺生产。
高纯度ATP的规模化生产及下游工艺解决方案
我们从大规模工业化生产三磷酸腺苷(ATP)的角度出发，利用成本低廉的发酵-层析分离的方法生产。由于三种磷酸腺苷的理化性质很相近，而且三磷酸腺苷酶转化液中各种杂质含量较多，导致下游分离纯化很困难。目前国内在分离方面存在的缺点是：所用树脂的分离度低；树脂利用率低；所得产品色素含量高；产品的收率和纯度较低等。
针对以上问题，我们提出了如下的分离策略：首先，由于三磷酸腺苷酶转化液中蛋白含量高，杂质种类多等特点，提出了用盐酸沉淀蛋白、离心、超滤等方法对KFP酶转化液进行预处理，得澄清液，达到了上柱要求。虽然ATP酶转化液中杂质含量很高、种类多，但是为简化工艺，缩短生产周期，蓝晓科技尝试只通过一种层析填料对ATP进行分离，等度洗脱即可达到99%纯度，收率也可以达到90+%。（此款层析介质同样适用于NTP及类似物。）
图1和2：蓝晓科技ATP纯化工艺制备的ATP HPLC色谱图
蓝晓科技大规模制备超高纯度ATP工艺案例
蓝晓科技大规模纯化超高纯度ATP用填料（具体型号请联系蓝晓科技电话：0512-65160522）与传统层析填料相比，显著提高了下游纯化工艺的生产效率和样品回收率，广泛应用于抗体、蛋白质、多肽、核酸等生物分子的捕获、中度纯化、精细纯化。
中试应用案例：
图2：纯化UV图
（1）层析填料：具体型号联系蓝晓科技电话：0512-65160522
（2）样品：5mg/ml浓度 ATP粗品
（3）波长：259nm
（4）柱体积：980.86ml
（5）流速：120cm/h；
图3：样品原液HPLC纯度检测（原液纯度89.44%）
图4：ATP目标HPLC纯度检测（纯度99.71%）
核苷、核苷酸(帽子类似物)纯化册及产品说明书（扫码即可查阅下载）
