测定水产品中有机硒和无机硒的应用方案

方案依据SN/T 4526--2016
GB/T 602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备
GB 5009.93食品安全国家标准食品中硒的测定(第一法︰氢化物原子荧光光谱法)
GB/T 6682︰分析实验室用水规格和试验方法

方法原理
水产品中的硒以不同的化学形式存在,包括无机硒和有机硒。试样中无机硒经(1＋1)盐酸水浴条件下振荡提取﹐与有机硒分离,用氢化物发生原子荧光光谱法测定无机硒含量。有机硒含量由总硒含量减去无机硒含量得到。

仪器及试剂和材料
AFS-680原子荧光光度计,附硒空心阴极灯。
恒温水浴振荡器。
电热板。
组织捣碎机。
除非另有规定,本方法所使用的试剂均为优级纯,实验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。 盐酸(ρ—1.19 g/ mL)。
盐酸(1＋1):吸取50 mL盐酸缓慢加入40 ml.水中,冷却后用水定容至100 mL。
盐酸(2＋98):吸取2 mL盐酸缓慢加入80 mL水中,冷却后用水定容至100 mL。
氢氧化钠(5 g/L):称取5.0 g氢氧化钠溶于水中,冷却后用水定容至1 000 mL。
硼氢化钠(10 g/L):称取10.0 g 硼氢化钠溶于氢氧化钠中,用氢氧化钠定容至1 o00 mL。
铁氰化钾(100 g/L):称取10.0 g铁氰化钾溶于水中,用水定容至100 ml,摇匀。
硒标准储备液(1 000 ug/mL):各元素标准溶液按GB/T 602方法配制,或直接使用市售有证国家标准溶液。
硒标准应用液(1.0 ug/ mL):由硒标准储备液以盐酸(2+98)逐级稀释而成。
环己烷。
正辛醇。
氩气;纯度≥99.99 %。

分析步骤
试样制备
取代表性样品约500 g,取其可食部分切碎后,用捣碎机将样品打成浆状,混匀,装入洁净容器封,标明标记。试样于―18 ℃下保存。在抽样及制样的操作过程中,应防止样品受到污染。

总硒的测定
测定按GB 5009.93食品中硒的测定(第一法︰氢化物原子荧光光法)进行。

无机硒的测定
试样处理
称取2.5 g试样(精确到0.001 g)置于25 mL具塞刻度试管中,加入盐酸(1+1)20.00 mL,并用盐酸(1+1)定容至25 mL,混匀,置于60℃恒温水浴中200 r/ min振荡浸提18 h,取出冷却至室温,再用脱脂棉过滤。将滤液倒入分液漏斗中,加入5 mL环己烷萃取，收集水相于烧杯中。准确吸4.00 mL水相于10 mL具塞刻度试管中,置于沸水浴中20 mm,取出冷却至室温,分别加入1.0 m铁氰化钾、3滴正辛醇，用水定容至10 ml,摇匀待测。
空白试验
除不称取试样外,均按上述步骤进行。

标准系列溶液的配制
分别准确吸取硒标准应用液(1.0ug/mL)0.00 mL,0.050 mL,0.200 mL,0.400 mL,0.60 mL,1.00 mL于50 mL容量瓶中,分别加入10 mL盐酸,5.0 mL铁氰化钾、3滴正辛醇,用水稀释并定容至刻度,摇匀待测。硒标准系列溶液浓度为0、1.00、4.00、8.00、12.0、20.0（ug/l）
以盐酸(2+98)为载流﹑硼氢化钠为还原剂,测定空白溶液的荧光强度后,按顺序由低到高分别测定硒系列标准工作溶液的荧光强度﹐根据荧光强度和对应的元素浓度绘制硒标准曲线。

结果计算
无机硒
按式(1)计算试样中无机硒含量:
.......（1）
式中:
X₁——试样中无机硒的含量,单位为毫克每千克mg/kg):
c₁——试样提取液测定浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
C_o1——试剂空白测定浓度,单位为纳克每毫升(ng/ mL)
m——试样质量,单位为克(g）
f ——f=25mL×10mL/4rnL。

有机硒
按式(2)计算试样中有机硒含量:
X₂=X - X₁.…......…（2）
式中:
X₂—-—试样中有机硒的含量,单位为毫克每千克(mg/ kg);
X——试样中总硒含量,单位为毫克每千克( mg/kg);
X₁——试样中无机硒的含量,单位为毫克每千克( mg/kg)。