天信和固定床生物反应器贴壁细胞培养操作指南
下面为大家详解天信和固定床生物反应器贴壁细胞培养操作步骤，以便您更好地理解贴壁细胞的操作过程。
操作步骤详解
一、清洗固定床生物反应器
1. 拧掉顶盖上的密封螺丝，取出罐体顶盖和固定篮；
2. 用纯化水冲洗玻璃罐内外壁和法兰盘；
3. 用柔软纱布擦洗罐体内部；
4. 反复冲洗固定筛片、套管、深层通气管等；
5. 用柔软纱布擦洗电极、桨叶等所有组件；
6. 用注射用水冲洗罐体内外壁和所有组件。
二、安装固定床生物反应器
1. 倒入已经完全膨胀、湿润的Cellcomb载体；
2. Cellcomb载体分布均匀后，下调固定篮上筛片，然后拧紧固定螺丝；
3. 倒入pH为7.4左右的PBS溶液清洗1次；
4. 再次倒入PBS溶液沒过载体、电极；
5. 安装好顶盖并拧紧螺丝；
6. 安装工艺软管并用止血钳夹紧软管；
7. 气密性检查：通入压缩空气，罐内压力升到0.5bar左右，停止通气并夹紧进气软管，放置6h检查罐体内的气压，6h后压力表没有变化，则表示气密性良好；
8. 高压灭菌：打开尾气、表层进气管路上止血钳，将罐体及所有组件进行高压灭菌，灭菌程序为敞口液体程序121℃，45分钟；
9. 灭菌结束后取出罐体，并放置至室温；
10. 将反应器罐体与控制器连接，连接温度、DO、pH、加热毯、搅拌电机等；
11. 在无菌环境下将反应器与废液桶、培养液桶、接种瓶等连接；
12. 接入压缩空气，将反应器罐内PBS通过管路排至废液桶，用细胞培养液清洗载体2次；
13. 再次加入细胞培养液，沒过搅拌桨叶、pH电极等，调整反应器参数，进行细胞预培养。
三、细胞贴壁培养
1. 接入待培养的动物细胞；
2. 将温度设置为37℃，溶氧为40%，pH值为7.0左右进行细胞培养；
3. 每24小时在线取样一次，进行生化检测和pH值测量；
温馨提示：共取两管样品，第一管废弃，只保留第二管样品；液体单向流动，只出不进。
4. 取样后将取样管末端浸入75%的酒精。
温馨提示：每24小时或每次操作都需填写生物反应器操作记录
四、下罐操作
1. 关掉控制面板上的所有的自动控制，只保留搅拌功能；
2. 用止血钳夹住深层进气和尾气出气，开启表层进气，并调节进气流量；
3. 拆掉加热毯，关掉搅拌功能，松开进气管道；
4. 将罐内培养液排入废液桶；
5. 排液完成后，夹紧进气管道和排液管道；
6. 断开电极与控制柜的连接，拆掉所有管路和附件；
7. 拆掉顶盖螺丝，打开顶盖，拧掉固定篮上的螺丝，取出上筛片；
8. 取样：分别在上层、中层及下层各取0.5g Cellcomb载体样品；
9. 在Cellcomb载体样品中加入10ml结晶紫，将加入结晶紫的载体样品放入摇床中（过夜后进行细胞计数）；
10. 用纯化水反复冲洗反应器固定筛片，并用柔软纱布擦洗，仔细冲洗、擦拭罐体内外壁、浆叶及其他组件；
11. 清洗完成后拧上顶盖螺丝，罐体内装满0.1M的氢氧化钠浸泡过夜。
五、细胞计数
过夜后对Cellcomb载体样品进行细胞计数：
1. 从摇床中取出载体样品并充分摇晃；
2. 在EP管内加入PBS溶液，将样品移入EP管中进行稀释；
3. 用移液枪反复吹打细胞悬液；
4. 将稀释后的细胞悬液打在细胞计数板上；
5. 在显微镜下进行细胞计数。
观看操作视频
请关注微信公众号“天信和生物”，回复“固定床”即可查看详细的固定床生物反应器贴壁细胞培养操作视频。
中生天信和——国药集团·中国生物旗下子公司，致力于为中国生物制药产业提供领先的生物制药过程支撑技术，提升中国生物制药上游原材料以及装备的自主可控能力，加快生物制药产业发展。
【核心优势业务】
个性化细胞培养基开发与生产
生物反应器自主设计与制造
生物制药过程工艺技术开发
热线：0512-63036292
网址：www.txhbio.com
地址：江苏省苏州市吴江区庞杨路8号 1F
