RT-PCR、qPCR、Real-time PCR介绍
讲解RT-PCR、qPCR、Real-time PCR
PCR，学名聚合酶链反应，心灵手巧的它最擅长做的就是织围巾将DNA分子套牢。换言之，就是在织围巾（PCR）的过程中，将几个元素织样（模板）、起针（引物对）、毛线（dNTP）和针（Taq酶以及缓冲液体系）串起来，让DNA分子无处可逃。
首先，在高温（95℃）时将织样拆解开（DNA双链解链），而后将已经织好的起针与织样相匹配（退火将已合成的引物与单链模板相结合），按照织样（模板），沿着起针（引物）用毛衣针（Taq酶）将毛线（dNTP）一针针连接上去（72℃延伸扩增）。
接着，通过对所有织样（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解链）及新的起针（引物）搭配（结合）、编织（Taq酶扩增）这样循环n次后，围巾的数量就以2的n次方（产物量就以2的n次方）增多了。如此，狡猾的DNA分子就只能在不断重复的热变形—复性—延伸的过程中束手就擒了。
RT-PCR（特指反转录PCR）作为PCR的一种变形反应，通常会先将RNA逆转录为DNA，再依此通过PCR进行扩增，该法只能定性却不能定量。要论定量，在PCR领域中，qRCR称第二，谁又敢称第一呢！目前在科研界中将Real-time PCR缩写为 qPCR（quantitative real-time PCR），也成为一种约定俗称的事。
显而易见，real-time RT-PCR指的就是qPCR+RT-PCR的组合，即将 mRNA/总RNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析。这一重磅组合常会与RNA-seq、芯片筛选等大腕明星强强联手。
那么究竟qPCR身负何等绝技，引得一众科研者如此看重呢？其实相比于PCR简单织件"围巾"，qPCR因天生自带荧光（荧光染料嵌合法—SYBR Green I和荧光探针法—Taqman探针），可将这件围巾瞬间美化为"荧光衣"，使得荧光与DNA产物数目成正比，且与DNA初始量有一定相关性。
PCR，学名聚合酶链反应，心灵手巧的它最擅长做的就是织围巾将DNA分子套牢。换言之，就是在织围巾（PCR）的过程中，将几个元素织样（模板）、起针（引物对）、毛线（dNTP）和针（Taq酶以及缓冲液体系）串起来，让DNA分子无处可逃。
首先，在高温（95℃）时将织样拆解开（DNA双链解链），而后将已经织好的起针与织样相匹配（退火将已合成的引物与单链模板相结合），按照织样（模板），沿着起针（引物）用毛衣针（Taq酶）将毛线（dNTP）一针针连接上去（72℃延伸扩增）。
接着，通过对所有织样（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解链）及新的起针（引物）搭配（结合）、编织（Taq酶扩增）这样循环n次后，围巾的数量就以2的n次方（产物量就以2的n次方）增多了。如此，狡猾的DNA分子就只能在不断重复的热变形—复性—延伸的过程中束手就擒了。
RT-PCR（特指反转录PCR）作为PCR的一种变形反应，通常会先将RNA逆转录为DNA，再依此通过PCR进行扩增，该法只能定性却不能定量。要论定量，在PCR领域中，qRCR称第二，谁又敢称第一呢！目前在科研界中将Real-time PCR缩写为 qPCR（quantitative real-time PCR），也成为一种约定俗称的事。
显而易见，real-time RT-PCR指的就是qPCR+RT-PCR的组合，即将 mRNA/总RNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析。这一重磅组合常会与RNA-seq、芯片筛选等大腕明星强强联手。
那么究竟qPCR身负何等绝技，引得一众科研者如此看重呢？其实相比于PCR简单织件"围巾"，qPCR因天生自带荧光（荧光染料嵌合法—SYBR Green I和荧光探针法—Taqman探针），可将这件围巾瞬间美化为"荧光衣"，使得荧光与DNA产物数目成正比，且与DNA初始量有一定相关性。
