PCR实验室又称基因扩增实验室,实验室原则上分为4个单独的工作区域,前雨区为扩增前区,后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开。
实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区到样品制备区到扩增区再到扩增产物分析区,不能逆向流动。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区域应设置缓冲间,工作间与缓冲间之间宜安装连锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连,需安装物品传递窗。每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254m,安装数量为每20m安装一支40W的紫外灯。
PCR实验室理想的布局应有一个专用走廊,试剂准备区、样品制备区、扩增区和产物分析区很规范地排列在一起,前三个区各有一个缓冲间,可供换工作服和工作鞋使用,顶上可装一紫外灯。
内实验区域设为正压或常压状态,缓冲间内设为负压状态(可上设一抽风装置),使这三个区的空气流向为由实验区域内向外,缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安装一种连锁装置,当一个门打开时,另一门必须处于关闭状态,防止出现两个门同时打开的情况。
产物分析区可不设缓冲间,但应设为负压状态(装一个排风扇即可)、使空气流向由外向内,以防止扩增产物的随空气流出。
每一区域都须有明确的标记,工作按试剂准备区、样品制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行,各区的仪器设备包括工作服、鞋、实验记录本和笔等都必须专用。
以上要求做不到的话,这些基本要求务必做到:四个区域必须是相互独立的;各区的仪器设备及各种物品必须是专用的;各区完全独立,缓冲间可有可无。如为一个区套一个区的模式,区间不能直通,应有缓冲间,供换工作服及鞋子用,并保证两个区域间始终处于完全的分隔状态;产物分析区应安装排风扇或其他抽风装置,维持负压。
②PCR实验室的设备清单
PCR实验室的主要设备:实验台、天平、冰箱、低温冰箱、离心机、洗眼器、加样器、振荡器、紫外灯、冰箱、生物安全柜(或洁净工作台、或者排风柜排毒柜)、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、通风排风系统、核酸扩增设备、酶标仪、洗板机、水浴箱、实时荧光定量PCR仪等实验室相关配件。以上设备根据各区的需求,数量不定。具体实验室设备清单请致电我们或留言
③PCR实验室各区的作用功能
PCR实验室包括4个区域:试剂准备区/样品制备区/扩增区/扩增产物分析区,各区分别满足不同的操作
试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。未设缓冲间的试剂储存和准备区,工作区域为正压。用于扩增的试剂应冰冻储存。
样品制备区:实验室样品的混样和测试样品的制备。未设缓冲间时工作区域为负压或减压,可安装排风系统。所用的器具在使用前应经过彻底清洗并消毒,防止交叉污染。
扩增区:PCR扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸扩增。未设缓冲间的扩增区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统。加样应在超净工作台(生物安全柜)內进行,超净工作台的气流方向宜选择垂流式。
扩增产物分析区:扩增产物的测定。未设缓冲间的扩增产物区,工作区为负压或减压,应安装排风系统。若实验仅采用全自动扩增检测仪(如实时荧光定量PCR仪),可将扩增区与扩增产物分析区合并为一个区。
④PCR实验室的装修施工
PCR实验室装修的要点
PCR实验室的墙体和顶棚应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
地面使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好,便于进行清扫,耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(≥800mm)接缝需要小于2mm。灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
在实验区和缓冲区顶部以及传送窗内部要安装外灯,消毒使用。在准备区和制备区设置移动紧外线灯,对实验台等进行局部消毒。
试剂和标本应通过机械连锁不锈钢传递窗传递。
⑤PCR实验室的通风系统
PCR实验室的各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
PCR实验室的净化要求,为避免各个实验区域间交又污染的可能,优先采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
⑥PCR实验室建设和使用规范的注意事项
根据实验室建设预算和实际使用情况选择对应的设备、洁净度、周边设施等
实验室区的工作人员安全防护方面要有应急方案
实验区内的所有相关物品都要做明显的标记,防止混淆
PCR各区域应尽量避免减少不必要的走动
建议实验室工作人员不同区域不同的工作服,且工作服不能带出
操作者培训上岗,经常更换使用的一次性医疗耗材