Western Blot转膜技术要点

这个年过的有点崎岖，在面对社会性问题时疫情给我们带来了很多正能量，相信很多还没返校的人已经给自己立了flag。在我们回望过去的一年，这个时代已经变了。任何的进步都被透明公开的呈现在我们面前，而我们看到的好消息远比自己收获的多，所以我们总忍不住问自己，“我成长了吗？”“我的实验能顺利些吗？” “我的科研之路还要继续吗？”
 
躺着想问题远比站着干大事来的容易，而成功的人总是在干大事的时候不断解决问题并总结问题。在科研的道路上，有如火箭式上升连发3篇Science的的90后CRISPR女神杨璐菡，有如深耕播种的共和国勋章得主袁隆平院士、屠呦呦等人，在感慨别人的成就时，我们却不曾深究过其背后的秘诀或精神。
 
世说“好事多磨”，小编看来并非经历多少磨难、重做多少实验才能成就好事、好实验，而是在成功的道路上多磨砺自己的思维并可控地执行在实践中。在师兄师姐们告诉你一堆他们摸索出来的道理时，你是全盘接收还是思辨下哪里不对？“这样做就对了！”就真的对了吗？“差不多就行了！”还能再粗糙点吗？！
 
所以今天“膜法学院”开讲的第一课是：WB实验的转印膜，你用对了吗？还在一“膜”到底吗？
选膜是个大学问，而你将这个选择权交谁了呢？“我们实验室一直用这个，用的挺好的。”待我们看看科技革新的成果再判断你是否有更好的选择。
 
首先，WB常用的转印膜一般是两种，依据材质分为PVDF膜（最常用）和NC膜，简要概括两者区别如下：
表1. PVDF膜和NC膜的特性和应用对比

 
其次，WB转印非常考验实验者对研究的蛋白及其所属环境是否足够了解。丰度/表达量如何？是否需要去除高丰度杂蛋白？分子量区间多大？转印效率如何？蛋白流失了吗？

图1. -P膜（左）和-PSQ膜（右）后面衬垫-PSQ膜，可以看到部分高丰度蛋白穿过-P膜渗漏到衬垫的膜上。
 
由此可见，膜孔径越小，小分子蛋白（<20kDa）渗漏/流失越少，蛋白载量越高，更适合低丰度蛋白检测。
 
其三，WB实验依据需要显色的形式分为化学发光和荧光两者，荧光WB对膜的背景要求更高，虽然可以依赖成像仪或者后期软件进行微调，但对于低丰度蛋白、多重荧光检测或者想发高分文章，还是需要原图示人。选择低荧光背景、高蛋白载量的膜，如下FL系列即为荧光WB最佳转印膜选择。

图2. 几种膜在荧光WB成像中的表现，FL膜具有最好的背景。
 
再者，考虑到安全因素、节约时间和经费，亦可选择安全型转印膜 Immobilon-E系列，省去甲醇预激活步骤。
 
综上，WB转印膜依据蛋白类型、分子量和成像形式有多种优质选择。
表2. Immobilon^®转印膜全系列产品选择指南

所以在你可以有选择的时候千万别凑合，每个细节都会决定我们将来的高度。

 
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